2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
  自噬在腫瘤耐藥中扮演著雙重角色,可以誘導(dǎo)細胞凋亡;但也可以通過減緩腫瘤細胞對放、化療的反應(yīng),導(dǎo)致耐藥。前期通過Agilent人microRNA寡核苷酸基因芯片V3,檢測耐藥前后microRNA表達的差異,結(jié)果發(fā)現(xiàn)miR-320a差異顯著。已知miR-320a在某些肝細胞癌、結(jié)腸癌及泌尿系統(tǒng)腫瘤中表達,并與藥物的敏感性相關(guān)。而且,自噬相關(guān)基因Atg14是miR-320a的靶基因。然而miR-320a在伊馬替尼誘導(dǎo)GIST

2、s耐藥過程中的作用尚無報道。自噬與GISTs相關(guān)的研究也非常少,故希望通過研究miR-320a與自噬的調(diào)節(jié)關(guān)系,探究其在GISTs耐藥過程中的作用。
  方法:
  首先觀察伊馬替尼敏感及耐藥組織中形態(tài)學(xué)差異;通過生物學(xué)信息庫預(yù)測miR-320a的靶基因及其可能通路基因,并通過免疫組織化學(xué)法檢測伊馬替尼敏感及耐藥組織中相關(guān)蛋白的表達差異。其次,建立人GISTs細胞耐藥株GIST882R,并對GISTs882進行耐藥前后的細胞

3、增殖檢測、劃痕實驗、細胞毒性實驗等生物功能學(xué)實驗確認耐藥株建立成功。并且通過MDC染色法檢測自噬小體形成,通過qRT-PCR檢測耐藥前后GISTs882細胞株miR-320a表達情況及下游相關(guān)基因表達水平變化;通過免疫細胞化學(xué)和Western Blotting檢測miR-320a下游靶基因編碼蛋白的表達。
  結(jié)果:
  我們發(fā)現(xiàn),耐藥GISTs組織較敏感組織在細胞形態(tài)由梭型變成上皮型或混合型,核分裂相明顯增多(P<0.05

4、),侵襲性增強。臨床標本組織芯片免疫組化染色發(fā)現(xiàn):與敏感組織相較,在耐藥組織中AKT、mTOR、AT(G14的蛋白表達升高,而BCL-2蛋白表達降低。在GISTs細胞系中,耐藥后的GISTs細胞株形態(tài)發(fā)生變化,遷移能力增強。GIST882R細胞株自噬體檢測表達強于GIST882S細胞株。PCR檢測發(fā)現(xiàn)耐藥株中ATK、mTOR、ATG14基因表達均上調(diào),BCL-2基因表達下調(diào),免疫細胞染色和Western Blotting檢測顯示耐藥細胞

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