嚴(yán)重創(chuàng)傷對(duì)小鼠骨髓來(lái)源的樹突狀細(xì)胞誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答能力的影響.pdf

1、目的：創(chuàng)傷是對(duì)人類生命健康與社會(huì)生產(chǎn)的嚴(yán)重威脅之一，在我國(guó)已成為繼心腦血管疾病和惡性腫瘤之外最大的死亡原因。嚴(yán)重創(chuàng)傷后機(jī)體免疫功能紊亂可導(dǎo)致創(chuàng)傷后感染和器官功能障礙等并發(fā)癥，深入研究有助于我們進(jìn)一步了解創(chuàng)傷及其并發(fā)癥的機(jī)制，并指導(dǎo)臨床治療。長(zhǎng)期以來(lái)，針對(duì)創(chuàng)傷后免疫功能紊亂的研究涉及了中性粒細(xì)胞、單核.巨噬細(xì)胞和T、B淋巴細(xì)胞等諸多方面，但作為免疫系統(tǒng)重要的成員之一——樹突狀細(xì)胞(dendritic cell，DC)在創(chuàng)傷后免疫功能紊亂中

2、的作用和地位迄今未被闡明。DC是聯(lián)系先天性免疫和適應(yīng)性免疫的橋梁，作為專職的抗原提呈細(xì)胞(APC)，DC在啟動(dòng)和調(diào)節(jié)先天性及適應(yīng)性免疫應(yīng)答中具有關(guān)鍵性的作用。已有研究證實(shí)，機(jī)體遭遇創(chuàng)傷后，DC在其分化發(fā)育過(guò)程、抗原提呈功能和細(xì)胞因子產(chǎn)生等方面均發(fā)生了障礙。但作為中樞免疫器官的骨髓，在創(chuàng)傷后向DC分化的過(guò)程及骨髓來(lái)源DC(BMDC)的功能是否會(huì)發(fā)生改變，尚未見報(bào)道。本研究著重探討了創(chuàng)傷對(duì)小鼠BMDC刺激T細(xì)胞增殖能力的影響。 方法

3、：①制備動(dòng)物創(chuàng)傷模型，致傷后24 h分離小鼠骨髓細(xì)胞，體外應(yīng)用重組小鼠粒細(xì)胞/巨噬細(xì)胞-集落刺激因子(rmGM-CSF)誘導(dǎo)樹突狀細(xì)胞；②通過(guò)混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)(MLR)檢測(cè)未成熟、成熟DC誘導(dǎo)異源T細(xì)胞的應(yīng)答能力；③應(yīng)用流式細(xì)胞術(shù)檢測(cè)BMDC表面主要組織相容性復(fù)合物II類分子(MHC II)及共刺激分子CD40、CD80、CD86表達(dá)；④應(yīng)用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)檢測(cè)脂多糖(LPS)刺激的BMDC培養(yǎng)上清中白細(xì)胞介素-12(IL

4、-12)p40、IL-12 p70以及白細(xì)胞介素-10(IL-IO)水平的變化。 結(jié)果：①在同等誘導(dǎo)條件下，創(chuàng)傷組小鼠骨髓細(xì)胞在體外誘導(dǎo)的DC(CD11c陽(yáng)性細(xì)胞)百分率與正常對(duì)照組相比無(wú)明顯差異，但其總數(shù)量明顯低于正常對(duì)照組(骨髓細(xì)胞誘導(dǎo)DC的擴(kuò)增倍數(shù)分別為3.9±0.5 vs5.4±0.6，P<0.05)；②創(chuàng)傷組小鼠BMDC，在經(jīng)過(guò)LPS誘導(dǎo)成熟前后，其介導(dǎo)的MLR值均明顯低于相應(yīng)的對(duì)照組值(P<0.05)；③以CDllc

5、陽(yáng)性細(xì)胞圈門，創(chuàng)傷小鼠BMDC在LPS刺激前后的CD40表達(dá)均明顯低于正常對(duì)照組(4±1.0％ vs22±3.5％，P<0.01；56:t7.5％ vs91±8.0％，P<0.01)，但MHCⅡ、CD80和CD86表達(dá)在兩組間無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)；④創(chuàng)傷組小鼠BMDC在體外經(jīng)LPS誘導(dǎo)成熟后，其IL-12 p40、IL-12 p70分泌水平均明顯低于正常對(duì)照組(45±6.5ng/L vs78+6.8 ng/L，P<0.05；9±

6、1.0 ng/L vs18±1.9 ng/L，P<0.05)，但分泌IL-10的能力與正常對(duì)照組相比無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05)。兩組未成熟DC分泌上述細(xì)胞因子水平均無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P>0.05) 結(jié)論：①創(chuàng)傷小鼠骨髓細(xì)胞對(duì)GM-CSF刺激增殖的敏感性降低；②創(chuàng)傷小鼠的BMDC功能發(fā)生障礙，其介導(dǎo)的混合淋巴細(xì)胞反應(yīng)顯著降低，對(duì)T細(xì)胞增殖的激發(fā)能力受到抑制；③創(chuàng)傷小鼠BMDC誘導(dǎo)T細(xì)胞應(yīng)答的能力降低可能與其CD40表達(dá)及IL-12分