細(xì)胞內(nèi)表達(dá)海洋來源的UPL1-AJL1-HdSABL基因抗腫瘤作用的機(jī)制研究.pdf

1、浙江理工大學(xué)學(xué)位論文原創(chuàng)性聲明本人鄭重聲明：我恪守學(xué)術(shù)道德，崇尚嚴(yán)謹(jǐn)學(xué)風(fēng)。所呈交的學(xué)位論文，是本人在導(dǎo)師的指導(dǎo)下，獨(dú)立進(jìn)行研究工作所取得的成果。除文中己明確注明和引用的內(nèi)容外，本論文不包含任何其他個(gè)人或集體己經(jīng)發(fā)表或撰寫過的作品及成果的內(nèi)容。論文為本人親自撰寫，我對(duì)所寫的內(nèi)容負(fù)責(zé)，并完全意識(shí)到本聲明的法律結(jié)果由本人承擔(dān)。學(xué)位論文作者簽名：揚(yáng)施羲日期：加￥年7月孑日摘要癌癥是威脅人類健康的主要疾病之一。與正常細(xì)胞相比，癌細(xì)胞內(nèi)很多蛋白的糖

2、基化發(fā)生改變。凝集素是一種糖類識(shí)別蛋白，可以特異性識(shí)別并結(jié)合特定的糖蛋白或糖脂，并通過糖類復(fù)合物調(diào)節(jié)細(xì)胞的生長(zhǎng)、分化、信號(hào)傳遞、細(xì)胞遷移、凋亡、免疫調(diào)節(jié)等生物過程，已被應(yīng)用于免疫學(xué)、腫瘤和細(xì)胞生物學(xué)等諸多方面的研究。之前，本課題組將掌葉半夏凝集素(Pinelliapedatisectaagglutinin，PPA)基因轉(zhuǎn)入癌癥細(xì)胞，發(fā)現(xiàn)PPA可與蛋白精氨酸甲基轉(zhuǎn)移酶5(proteinargininemethyltransferase5，

3、PRMT5)結(jié)合，最終進(jìn)入細(xì)胞核導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞死亡。研究提示凝集素超家族中可能蘊(yùn)藏抗癌基因。海洋凝集素種類繁多，可識(shí)別各種糖類，本文中選取海洋生物孔石莼(Uivapertusa)N一乙酰葡糖胺凝集素UPL1、盤鮑魚(Haliotisdiscusdiscus)唾液酸凝集素HdSABL以及日本鰻魚叫nguillajaponica)半乳糖凝集素AJLI，將基因?qū)肽[瘤細(xì)胞，在細(xì)胞水平上研究它們的毒性及機(jī)制。一將彳兒J、HdSABL、卿三J基因克

4、隆到真核載體pEGFPC1中，觀察其蛋白在惡性腫瘤細(xì)胞內(nèi)的亞細(xì)胞定位，并構(gòu)建攜帶A兕J、HdSABL、UPLl基因的復(fù)制缺陷型腺病毒(ADFLAGAJLl，ADFLAGHdSABL及ADFLAG—UPL)與對(duì)照病毒AD—F翻G，并在體外測(cè)定其對(duì)多種癌細(xì)胞的殺傷效果，探索其在細(xì)胞內(nèi)的抑癌作用機(jī)理。本論文研究可為癌癥基因治療提供新的治療基因。方法(1)構(gòu)建pEGFPGENEC1系列真核表達(dá)載體：(2)熒光顯微鏡觀察，篩選對(duì)癌細(xì)胞有毒性的凝集