IBV DNA疫苗、DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物在雞體內(nèi)的分布及安全性研究.pdf

1、DNA疫苗在機(jī)體內(nèi)的分布和安全性是研究者們普遍關(guān)注的問題。本研究為IBVDNA疫苗及脂質(zhì)體在DNA疫苗中的應(yīng)用提供了科學(xué)依據(jù)。 為研究本實(shí)驗(yàn)室構(gòu)建的禽傳染性支氣管炎病毒(IBV)真核表達(dá)質(zhì)粒pIBVS1、pIBVM、pIBVN混合DNA疫苗及DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物在雞體內(nèi)的組織分布和安全性，DNA疫苗經(jīng)腿部肌肉分點(diǎn)免疫接種7日齡非免疫健康雛雞，DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物經(jīng)腿部肌肉及滴鼻、點(diǎn)眼兩種免疫途徑接種相同日齡的非免疫健康雛

2、雞，利用PCR方法對(duì)疫苗在雞體內(nèi)的分布及與雞細(xì)胞基因組的整合進(jìn)行檢測(cè)研究。并通過肌肉注射和滴鼻、點(diǎn)眼兩種途徑對(duì)1日齡雛雞免疫接種DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物；相同劑量連續(xù)免疫接種7日齡雛雞以及5倍常規(guī)使用劑量(超大劑量)免疫接種7日齡雛雞，來對(duì)DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物進(jìn)行免疫毒性實(shí)驗(yàn)研究。實(shí)驗(yàn)期間對(duì)實(shí)驗(yàn)雞進(jìn)行一般臨床表現(xiàn)觀察，并分別在免疫后48h和30日齡進(jìn)行血液學(xué)、血液生化學(xué)、病理及病理組織學(xué)檢測(cè)。 分布實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明：肌注DNA疫

3、苗、肌注及滴鼻、點(diǎn)眼免疫接種的DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物均于免疫接種后24h，在血液和所有檢測(cè)的組織中檢測(cè)到質(zhì)粒pIBVS1，pIBVM，pIBVN的分布，并能持續(xù)分布90d；在免疫后120d，疫苗免疫各組在血液中均已檢測(cè)不到三種質(zhì)粒的分布，各組織器官中均檢測(cè)不到質(zhì)粒pIBVS1的分布，DNA疫苗組僅在心臟、肺臟、腎臟、胸腺及注射部位肌肉檢測(cè)到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布，DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物肌肉注射組僅在心臟、脾臟、肺臟、腎臟及

4、注射部位肌肉檢測(cè)到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布，而DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物滴鼻、點(diǎn)眼免疫組除了在心臟和肝臟中檢測(cè)不到質(zhì)粒DNA的分布外，其余組織中均能檢測(cè)到質(zhì)粒pIBVM，pIBVN的分布。 安全性實(shí)驗(yàn)表明：純化后的組織基因組DNA經(jīng)PCR擴(kuò)增均呈陰性，未發(fā)現(xiàn)整合現(xiàn)象。試驗(yàn)期間，各組動(dòng)物行為活動(dòng)未見異常，無死亡。免疫后48h，單劑量肌肉注射及滴鼻、點(diǎn)眼免疫組的紅細(xì)胞(RBC)數(shù)量，紅細(xì)胞壓積(HCT)與對(duì)照組相比差異顯著(P

5、＜0.05)，血紅蛋白(HGB)含量與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)，但都屬于正常波動(dòng)范圍內(nèi)，恢復(fù)期間各組血液學(xué)指標(biāo)與對(duì)照組相比無顯著性差異(P＞0.05)。免疫后48h，超大劑量組總蛋白(TP)及白蛋白(ALB)含量與對(duì)照組相比差異極顯著(P＜0.01)，其余各組血液生化指標(biāo)與對(duì)照組相比均無顯著性差異(P＞0.05)，恢復(fù)期間，所有疫苗免疫組血液生化指標(biāo)均與對(duì)照組無顯著性差異(P＞0.05)，超大劑量接種可能因劑量偏高，在免疫初

6、期對(duì)雛雞肝臟的蛋白質(zhì)合成功能造成影響，但后期得以修復(fù)。病理剖解無異常變化，各疫苗免疫組與對(duì)照組相比無明顯因疫苗引起的病理變化。綜上所述，DNA疫苗及DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物能在免疫接種后24h內(nèi)迅速分布于全身，DNA疫苗能在心臟、肺臟、腎臟、胸腺及注射部位肌肉內(nèi)持續(xù)分布120d以上，通過滴鼻、點(diǎn)眼免疫接種的DNA疫苗-脂質(zhì)體復(fù)合物在分布的廣度上優(yōu)于DNA疫苗。未檢測(cè)到外源質(zhì)粒DNA與雞細(xì)胞染色體發(fā)生整合的現(xiàn)象，無疫苗引起的免疫毒性反應(yīng)，