禽傳染性支氣管炎DNA疫苗脂質(zhì)體、殼聚糖復(fù)合物的制備及免疫效果研究.pdf

1、本文對(duì)禽傳染性支氣管炎(IB)DNA疫苗脂質(zhì)體、殼聚糖復(fù)合物的制備工藝進(jìn)行了研究，制備了IB的脂質(zhì)體/DNA、殼聚糖/DNA及脂質(zhì)體/(pDNAIL-2+DNA)復(fù)合物(pDNAIL-2為雞白介素-2真核質(zhì)粒)三種DNA疫苗，免疫7日齡健康雛雞，以裸IBDNA疫苗為對(duì)照，采用流式細(xì)胞儀(FACS)和間接ELISA試驗(yàn)分別對(duì)宿主外周血T淋巴細(xì)胞亞類CD4+、CD8+和特異性抗IBV血清IgG的動(dòng)態(tài)變化進(jìn)行檢測(cè)，并在免疫后35天以IBV強(qiáng)毒

2、株進(jìn)行攻毒保護(hù)實(shí)驗(yàn)。 IBDNA疫苗復(fù)合物制備工藝研究試驗(yàn)結(jié)果表明，在卵磷脂與膽固醇摩爾比為5∶4、1ml乳化水脂質(zhì)用量40mg、陽(yáng)性材料SA占卵磷脂的摩爾數(shù)為1/5、有機(jī)相與無(wú)機(jī)相體積比為2∶1時(shí)采用逆向蒸發(fā)法制備可得到形態(tài)規(guī)則、包封率高的脂質(zhì)體/DNA復(fù)合物混懸液，且脂質(zhì)體與質(zhì)粒DNA的結(jié)合比為20∶1；殼聚糖DNA疫苗復(fù)合物的制備工藝為：0.4％殼聚糖溶液與質(zhì)粒DNA以10∶1質(zhì)量比采用復(fù)凝集法混合。 以不同免疫佐

3、劑的IBDNA疫苗經(jīng)肌肉注射(I.M)免疫健康雛雞，檢測(cè)免疫雞外周血中CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)及血清中特異性抗IBV血清IgG動(dòng)態(tài)變化。結(jié)果表明：CD4+、CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)量，除pDNAIL-2/DNA疫苗組僅略高于對(duì)照組外，其他試驗(yàn)組均與DNA疫苗對(duì)照組有差異(P＜0.01或P＜0.05)；在誘導(dǎo)特異性IBV血清抗體方面，試驗(yàn)組的IgG水平高于對(duì)照組，但僅脂質(zhì)體/(pDNAIL-2+DNA)疫苗組在10d時(shí)與對(duì)照組差異顯著。

4、各試驗(yàn)組間，脂質(zhì)體/pDNAIL-2+DNA疫苗組的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)量高于pDNAIL-2/DNA疫苗(P＜0.01)和殼聚糖/DNA疫苗組(P＜0.05)，及脂質(zhì)體/DNA疫苗組高于pDNAIL-2/DNA疫苗組(P＜0.05)；脂質(zhì)體/pDNAIL-2+DNA疫苗誘導(dǎo)的特異性IgG在10d時(shí)高于pDNAIL-2/DNA疫苗組(P＜0.05)，其它情況下組間均無(wú)顯著差異。攻毒保護(hù)試驗(yàn)結(jié)果表明，對(duì)強(qiáng)毒的抵抗力脂質(zhì)體/pDNAIL-2

5、+DNA疫苗=脂質(zhì)體/DNA疫苗＞pDNAIL-2/DNA疫苗=殼聚糖/DNA疫苗＞裸DNA疫苗，表明佐劑不僅能增強(qiáng)DNA疫苗誘導(dǎo)細(xì)胞和體液免疫應(yīng)答的能力，特別是細(xì)胞免疫反應(yīng)，而且它們所介導(dǎo)的免疫反應(yīng)對(duì)保護(hù)宿主抵抗強(qiáng)毒的攻擊中，脂質(zhì)體的作用強(qiáng)于殼聚糖。 以脂質(zhì)體/DNA和殼聚糖/DNA疫苗經(jīng)滴鼻或眼途徑(I.N)免疫雛雞后的細(xì)胞免疫反應(yīng)檢測(cè)結(jié)果表明，殼聚糖介導(dǎo)DNA疫苗刺激機(jī)體產(chǎn)生的CD4+T淋巴細(xì)胞數(shù)在免疫10d后高于脂質(zhì)體/

6、DNA疫苗組，但二者僅在第15d有顯著差異；脂質(zhì)體/DNA疫苗組的CD8+T淋巴細(xì)胞數(shù)在免疫后5d即達(dá)到最大值，而殼聚糖/DNA疫苗組則在第15d，且二者間無(wú)顯著差異；殼聚糖/DNA疫苗誘導(dǎo)的特異性IBV血清抗體IgG水平僅略高于脂質(zhì)體/DNA疫苗組；而對(duì)強(qiáng)毒的抵抗力脂質(zhì)體/DNA疫苗大于殼聚糖/DNA疫苗。由此表明，DNA疫苗經(jīng)粘膜免疫途徑也能刺激機(jī)體產(chǎn)生較強(qiáng)的細(xì)胞和體液免疫反應(yīng)，且脂質(zhì)體介導(dǎo)的DNA疫苗的免疫保護(hù)作用比殼聚糖強(qiáng)。