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文檔簡(jiǎn)介
1、本研究根據(jù)本課題組在GeneBank中注冊(cè)的禽傳染性支氣管炎病毒中國分離株的S1基因序列(AF397527、AF397528、AF397529和AF036937)及畢赤酵母分泌型表達(dá)載體pPIC9K的序列設(shè)計(jì)引物，用RT-PCR方法擴(kuò)增出IBVS1基因。對(duì)該基因克隆測(cè)序結(jié)果表明，IBVS1基因表達(dá)片段序列長度為1566bp，編碼521個(gè)氨基酸，5'端不含信號(hào)肽序列，3'端添加了終止密碼子。用限制性內(nèi)切酶SnaBⅠ和NotⅠ將S1基因和載
2、體pPIC9K酶切回收后連接，構(gòu)建了S1基因的表達(dá)質(zhì)粒pPIC9K-S1。用限制性內(nèi)切酶BglⅡ?qū)⒈磉_(dá)質(zhì)粒pPIC9K-S1線性化，然后用電轉(zhuǎn)化的方法導(dǎo)入畢赤酵母GS115。將在MD平板上生長的轉(zhuǎn)化子經(jīng)過PCR鑒定和表型篩選后，獲得了整合型陽性重組菌株，命名為GS115/pPIC9K-S1His+Muts。將重組菌株在1％的甲醇中進(jìn)行誘導(dǎo)分泌表達(dá)，通過SDS-PAGE和Western-blot對(duì)表達(dá)產(chǎn)物進(jìn)行分析，結(jié)果表明，IBVS1基因
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