硫酸鈹誘發(fā)人胚肺細胞凋亡機制及枸杞多糖保護作用的初步研究.pdf

1、目的：用體外實驗的研究方法，觀察硫酸鈹（BeSO4）致人胚肺成纖維細胞（MRC-5）活性氧（ROS）的變化、相關凋亡基因 c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3的表達水平及細胞內鈣離子濃度及三磷酸肌醇受體（IP3R）表達的改變，探討硫酸鈹是否通過影響活性氧和鈣離子導致人胚肺細胞損傷，同時觀察枸杞多糖（LBP）是否對硫酸鈹致人胚肺細胞損傷具有保護作用。
　　方法：體外培養(yǎng)人胚肺成纖維細胞，共分為空白對照組、硫酸鈹低中高劑

2、量組、枸杞多糖保護組及枸杞多糖對照組等6組。硫酸鈹給予劑量分別為0、1、10、100μmol/L，枸杞多糖劑量為10μmol/L。細胞生長至對數生長期，根據實驗需求，達到細胞密度后，加入藥物培養(yǎng)24h收集細胞，分別進行以下實驗：1.流式細胞術檢測細胞內活性氧（ROS）；2.免疫組化（SP）法檢測c-fos、bcl-2、bax、Caspase-3相關的表達3.激光共聚焦法檢測細胞內[Ca2+]的水平；4.RT-PCR測定三磷酸肌醇受體(I

3、P3R)的表達。
　　結果：
　　1．BeSO4中、高劑量組ROS含量與空白對照組相比明顯增高，表達細胞數增多，具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　2.細胞加藥培養(yǎng)24h后，免疫組化結果顯示： BeSO4低、中、高劑量組 c-fos、bcl-2表達均高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05），且隨著藥物劑量增加表達水平不斷增高。BeSO4中、高劑量組bax表達均低于空白對照組、BeSO4低、中、高劑量組Casp

4、ase-3表達均低于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）且隨著藥物劑量增加表達水平不斷降低。
　　3.硫酸鈹高劑量組細胞內 Ca2+濃度明顯高于空白對照組，差異有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。
　　4.激光共聚焦顯微鏡下，100μmol/L BeSO4組中，細胞核呈現(xiàn)出明亮的綠色熒光，細胞分界清楚呈梭型，BeSO4+LBP組細胞呈圓形，胞體淡綠色，細胞周圍可見綠色熒光小點。
　　5.BeSO4低、中、高劑量組Ⅲ型

5、 IP3R表達與空白對照組比較差異均有統(tǒng)計學意義(P<0.01）；
　　6.LBP對BeSO4損傷細胞的保護作用：BeSO4組ROS含量高于空白對照組（P<0.01）、LBP組ROS含量低于空白對照組（P<0.01），二者具有交互作用（P<0.05）。對于bcl-2、Caspase-3的表達 BeSO4和LBP具有交互效應（P<0.05或P<0.01）。Ca2+和IP3R檢測結果顯示BeSO4和LBP具有交互作用（P<0.05或P

6、<0.01）。
　　結論：
　　1.BeSO4可致MRC-5細胞內ROS含量升高，LBP對此有一定保護作用。
　　2.BeSO4可致MRC-5細胞內的c-fos、bcl-2基因表達量升高；bax、Caspase-3基因表達量減少，LBP對此有一定的調節(jié)作用。
　　3.BeSO4可致MRC-5細胞內鈣離子濃度升高，LBP對其有一定保護作用。
　　4.BeSO4可能通過IP3R受體通道，造成MRC-5細胞鈣超載