枸杞多糖對腦出血大鼠腦保護作用及其機制的實驗研究.pdf

1、目的：
　　研究枸杞多糖(Lycium Barbarum Polysaccharides,LBP)對腦出血(Intracerebral hemorrhage,ICH)模型大鼠繼發(fā)性腦損傷的影響，進而探索LBP腦保護作用及其可能機制
　　方法：
　　180只SD大鼠，隨機分為假手術(shù)（Ⅰ）組、模型（Ⅱ）組、LBP低劑量（Ⅲ）組、LBP中劑量（Ⅳ）組、LBP高劑量（Ⅴ）組、尼莫地平（Ⅵ）組，每組30只；術(shù)前15日，Ⅲ、Ⅳ、Ⅴ

2、組分別給予LBP50、100、200mg·kg-1灌胃，Ⅵ組給予尼莫地平10mg·kg-1灌胃，Ⅰ、Ⅱ組給予等體積生理鹽水，1次/日；灌胃結(jié)束，采用自體血二次注入法制作大鼠腦出血模型；腦出血后4h、8h、12h、24h、48h，對各組大鼠進行Bederson神經(jīng)功能評分；48h后，部分大鼠直接斷頭取腦，部分大鼠4％多聚甲醛灌注后取腦；檢測各組大鼠腦組織水腫體積、腦含水量、MDA含量、SOD活性；HE染色后，觀察腦出血區(qū)及其周圍腦組織中各

3、細胞的大小、形態(tài)；利用TUNEL法檢測神經(jīng)細胞凋亡；利用Western Blot、免疫組化、RT-PCR技術(shù)檢測ICH后PAR-1、TNF-α、Bcl-2的表達。
　　結(jié)果：
　　1、與假手術(shù)組比較，模型組各時點神經(jīng)功能評分均顯著增高（P<0.05）；與同時點模型組比較，中、高劑量組神經(jīng)功能評分在12h、24h和48h明顯低于模型組（P<0.05），尼莫地平組24h和48h明顯低于模型組（P<0.05）；
　　2、與假

4、手術(shù)組比較，模型組腦組織水腫體積較大、腦含水量較高、SOD活性較低、MDA含量較多(P<0.05或P<0.01)。與模型組比較，各給藥組腦組織水腫體積減小、腦含水量降低、SOD活性增高、MDA含量降低顯著（P<0.05或P<0.01）；
　　3、HE染色發(fā)現(xiàn)：腦出血后，出血區(qū)有血凝塊形成，期間夾雜著死亡細胞的胞核及細胞碎片，出血區(qū)周圍腦組織可見不同程度的破壞，神經(jīng)細胞與神經(jīng)膠質(zhì)細胞排列紊亂；但未能發(fā)現(xiàn)各給藥組與模型組之間的差異；<

5、br>　　4、TUNEL實驗發(fā)現(xiàn)，外界機械刺激均可以引起神經(jīng)細胞凋亡，但是較單純的手術(shù)進針而言,腦出血導(dǎo)致的神經(jīng)細胞凋亡更加顯著。表現(xiàn)為：TUNEL陽性細胞在腦出血組，大量分布于出血區(qū)及其周圍腦組織中，而在假手術(shù)組，僅少量分布于針道周圍。LBP各劑量組與尼莫地平組TUNEL陽性細胞比例較模型組顯著下降（P<0.01或P<0.05）；
　　5、ICH組PAR-1陽性細胞的比例，PAR-1蛋白的表達，PAR-1mRNA的表達較假手術(shù)組

6、（P<0.05或P<0.01）.與模型組比較，LBP各劑量組PAR-1蛋白的表達顯著減少（P<0.05），PAR-1陽性細胞比例顯著降低（P<0.01），PAR-1mRNA的表達顯著減少（P<0.01）；
　　6、腦出血后，TNF-α的表達顯著增加、Bcl-2的表達顯著減少，而LBP能夠抵抗腦出血導(dǎo)致的這些改變，表現(xiàn)為：①、LBP各組TNF-α蛋白的表達、TNF-α陽性細胞比例、TNF-αmRNA的表達均較模型組顯著減少（P<0.

7、01或P<0.05）；②、LBP各組Bcl-2蛋白的表達、Bcl-2陽性細胞比例及Bcl-2mRNA的表達顯著增加（P<0.01或P<0.05）。
　　結(jié)論：
　　1、枸杞多糖的預(yù)防性應(yīng)用，能夠減輕腦出血導(dǎo)致的神經(jīng)功能缺失（該作用在腦出血12h以后才逐漸顯現(xiàn)）、腦組織水腫、氧自由基損傷、神經(jīng)細胞凋亡。
　　2、枸杞多糖對腦出血繼發(fā)神經(jīng)細胞凋亡的抑制機制，可能是通過干預(yù)PAR-1的表達，也可能是通過抑制細胞凋亡的內(nèi)源途徑