巴曲酶對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠的神經(jīng)保護(hù)作用及其機(jī)制研究.pdf

1、研究目的：腦出血（ICH）是一種高發(fā)病率和高死亡率的腦血管疾病類型。腦出血后，由于血腫面積不斷擴(kuò)大，導(dǎo)致并加重了周圍腦組織水腫，在很大程度上造成了神經(jīng)功能的損傷，因而腦出血患者常伴有神經(jīng)功能障礙，且多數(shù)存活者留有永久性神經(jīng)功能缺失。減輕出血后繼發(fā)性腦損傷則成為臨床上治療腦出血的重點(diǎn)，目前應(yīng)用較為廣泛的治療方法是使用脫水劑常規(guī)控制腦水腫、降低顱內(nèi)壓；纖溶酶原激活劑如重組鏈激酶（r-SK）、組織纖溶酶原激活劑（t-PA）溶解凝血塊；以及必要

2、時(shí)進(jìn)行手術(shù)清除血腫等。但出血后腦水腫產(chǎn)生的機(jī)制非常復(fù)雜，且纖溶酶原激活劑在溶解血塊同時(shí)，又加強(qiáng)了凝血酶介導(dǎo)的腦損傷。因此，尚需尋求更為安全有效的治療藥物。 巴曲酶是一種從蝮蛇毒素中提取的單組分的蛇毒降纖酶制劑，該藥自上市以來，在國內(nèi)外急性腦梗塞的臨床溶栓治療中已得到廣泛應(yīng)用。它不僅能夠通過分解纖維蛋白原、誘導(dǎo)內(nèi)皮細(xì)胞釋放t-PA、激活纖溶酶原，有效抑制血栓形成并溶解血栓；還能夠減輕卒中后腦水腫和腦組織損傷，具有神經(jīng)保護(hù)作用。

3、 本課題觀察了巴曲酶對(duì)實(shí)驗(yàn)性腦出血大鼠的干預(yù)作用，研究其對(duì)腦出血后血腫及周圍腦水腫所致的腦損傷是否具有保護(hù)作用，并探討其可能的神經(jīng)保護(hù)作用機(jī)制。 研究方法：將大鼠分為假手術(shù)組，模型組，巴曲酶小、中、大劑量組及尼莫地平陽性對(duì)照組。在腦立體定向儀上，根據(jù)大鼠腦立體定位圖譜定位腦部尾狀核后，用微量注射器向尾狀核注射Ⅶ型膠原酶建立大鼠腦出血模型。假手術(shù)組僅于尾狀核注射生理鹽水，不做出血處理。各用藥組于尾狀核注射膠原酶同時(shí)腹腔注射給藥

4、。術(shù)后4小時(shí)及24小時(shí)進(jìn)行神經(jīng)行為學(xué)評(píng)分；末次評(píng)分后斷頭取腦，干濕重法，測(cè)定腦組織含水量；腦組織切片HE染色，電鏡下觀察腦組織病理形態(tài)學(xué)改變，以觀察巴曲酶對(duì)腦出血大鼠是否具有神經(jīng)保護(hù)作用。同時(shí)，用試劑盒測(cè)定腦組織中超氧化物歧化酶（SOD）活性和丙二醛（MDA）含量變化；采用懸浮細(xì)胞的熒光分光光度計(jì)法測(cè)神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)游離鈣離子濃度（[Ca2+]i）的變化；以及用SABC（鏈霉親和素生物素酶復(fù)合物）免疫組化法檢測(cè)腦組織中血紅素加氧酶-2（HO-

5、2）和神經(jīng)膠質(zhì)元纖維酸性蛋白（GFAP）的表達(dá)來探討其可能的作用機(jī)制。 研究結(jié)果：（1）巴曲酶（8、16 BU/kg）及尼莫地平可顯著改善大鼠腦出血4h及24h的神經(jīng)肌肉運(yùn)動(dòng)功能，降低出血后腦含水量，改善腦組織的病理形態(tài)學(xué)改變。與模型組比較，巴曲酶8 BU/kg和16BU/kg腦含水量從49.5±1.0分別下降到47.4±1.2和46.8±1.4，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）；（2）巴曲酶（8、16 BU/kg）能夠明顯升

6、高腦出血大鼠腦組織內(nèi)SOD活性，減少M(fèi)DA含量和[Ca2+]i，并能抑制腦組織中HO-2和GFAP的過度表達(dá)。與模型組比較，巴曲酶8BU/kg和16 BU/kg SOD活力從57.4±29.5分別升高到116.8±19.6和126.2±31.4、MDA含量從1.4±0.39分別下降到1.0±0.3和0.83±0.2、[Ca2+]i從257.4±35.3分別下降到182.7±21.2和152.3±12.1，差異具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05

7、）；（3）巴曲酶（4BU/kg）對(duì)大鼠出血后4h的神經(jīng)肌肉運(yùn)動(dòng)功能、腦組織含水量和病理形態(tài)學(xué)沒有明顯改善，僅對(duì)出血后24h的神經(jīng)肌肉運(yùn)動(dòng)功能有一定作用；巴曲酶（4BU/kg）也沒有明顯升高腦內(nèi)SOD活性、減少M(fèi)DA含量和抑制腦組織中HO-2和GFAP的表達(dá)，但對(duì)[Ca2+]i的抑制作用比較明顯，其[Ca2+]i為196.0±15.1，與模型組257.4±35.3比較，差異均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P<0.05）。 研究結(jié)論：（1）巴曲酶（

8、8、16 BU/kg）對(duì)大鼠腦出血后神經(jīng)損傷有明顯保護(hù)作用；（2）巴曲酶（8、16 BU/kg）的作用機(jī)理可能與減輕大鼠腦出血后腦水腫程度、抗氧化損傷、抑制鈣超載、及降低紅細(xì)胞降解產(chǎn)物毒性和調(diào)節(jié)星形膠質(zhì)細(xì)胞過度增生有關(guān)；（3）巴曲酶（4BU/kg）對(duì)大鼠腦出血沒有表現(xiàn)出明顯的神經(jīng)保護(hù)作用；但對(duì)大鼠出血后24小時(shí)的神經(jīng)行為學(xué)癥狀改善比較明顯，這除與腦卒中的運(yùn)動(dòng)功能障礙隨時(shí)間有一定的減輕有關(guān)外，此劑量組對(duì)[Ca2+]i的抑制作用也是其可能的