RNA干擾沉默G9a基因?qū)ξ赴㎝CG803細(xì)胞增殖、凋亡及組蛋白H3K9甲基化的影響.pdf

1、目的：研究組蛋白甲基化酶G9a、組蛋白H3K9me1、組蛋白H3K9me2在175例胃癌的表達(dá)差異及臨床意義。觀察siRNA干擾沉默G9a基因后對胃癌MGC803細(xì)胞株細(xì)胞生物學(xué)的改變、組蛋白甲基化及乙?；挠绊懀接懫淇赡艿臋C(jī)制。
　　方法：1、免疫組織化學(xué)方法檢測胃癌、慢性淺表性胃炎、萎縮性胃炎、中重度不典型增生標(biāo)本中甲基化酶G9a、組蛋白H3K9me1、組蛋白H3K9me2蛋白的表達(dá)差異，統(tǒng)計學(xué)分析探討其臨床意義。2、設(shè)計針

2、對G9a基因4個小干擾RNA片段，經(jīng)Lipofectamine2000脂質(zhì)體轉(zhuǎn)染入MGC803細(xì)胞，RT-PCR及蛋白免疫印跡法（Western Blot）篩選最佳干擾片段。3、MTS法繪制G9a基因干擾沉默后MGC803細(xì)胞的生長曲線，TUNEL分析細(xì)胞調(diào)亡。4、Western blot檢測G9a基因干擾沉默后對MGC803細(xì)胞凋亡相關(guān)蛋白BCL-2、Procaspase-3、Bax；組蛋白H3K9me1、H3K9me2、H3K9me

3、3、組蛋白H3K27me1、組蛋白H3K27me2、組蛋白H3乙?；癄顟B(tài)的影響。
　　結(jié)果：1、胃癌組織中組蛋白甲基化酶G9a的陽性表達(dá)為87.43％（153/175），H3K9me2為90.28%（158/175），上述兩者顯著高于淺表性胃炎（33.33%、36.67%）、萎縮性胃炎（43.33%、40.00%）、中重度不典型增生（46.67%、56.67%），p<0.05，有統(tǒng)計學(xué)意義；與胃癌的分化程度、浸潤深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移及

4、TNM分期相關(guān)。組蛋白H3K9me1在胃癌及其它各組比較未見明顯的差異，胃癌50.86%%（89/175），淺表性胃炎53.33%(16/30)，萎縮性胃炎50.00%（15/30）、中重度不典型增生56.67%（17/30），p>0.05，無統(tǒng)計學(xué)意義。2、篩選出組蛋白甲基化酶G9a最佳干擾片段，序列為：正義鏈5'- UUCAGUCUCUACUAUGAUUTT-3'，反義鏈5'-AAUCAUAGUAGAGACUGAATT-3'。3、G

5、9a siRNA能下調(diào)G9a基因的mRNA和蛋白表達(dá)，抑制MGC-803細(xì)胞增殖；下調(diào)抑制凋亡基因BCL-2，上調(diào)Bax表達(dá)增強(qiáng)，啟動效益蛋白Procaspase-3，誘導(dǎo)細(xì)胞凋亡。4、G9a siRNA下調(diào)組蛋白H3K9me1、H3K9me2及組蛋白H3K27me1、組蛋白H3K27me2水平，而對組蛋白H3K9me3及組蛋白H3乙?；療o影響。
　　結(jié)論：1、胃癌組織中組蛋白甲基化酶G9a、H3K9me2高表達(dá)，與病理分化程度及