孕期酒精暴露致小鼠胚胎心臟組蛋白H3K9高乙?；c心臟發(fā)育相關基因表達紊亂.pdf

1、目的:
　　孕期飲酒可以導致胎兒酒精綜合征，其中先天性心臟病(Congenitalheart diseases)為常見伴發(fā)畸形之一，目前其內(nèi)在機制仍不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)組蛋白乙酰化修飾的改變能夠干擾心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子的表達，同時阻礙間充質(zhì)干細胞向心肌樣細胞分化，而乙醇及其代謝產(chǎn)物可以選擇性的升高心肌祖細胞CP15-13(Cardiac progenitorcells15-13)組蛋白H3第九位賴氨酸(H3 Lysine9

2、，H3K9)乙?；郊靶呐K發(fā)育相關基因表達。推測此可能為酒精致心臟發(fā)育畸形的機制之一。本研究通過構(gòu)建酒精致胚胎心臟發(fā)育異常小鼠動物模型，在體內(nèi)水平探討孕期酒精暴露所致胚胎心臟發(fā)育異常的表觀遺傳機制，為該疾病發(fā)病機制的探尋提供全新思路。
　　材料與方法:
　　選取雌性昆明小鼠，受孕后分組飼養(yǎng)，實驗組于小鼠孕期心臟發(fā)育時間窗E7.5-E15.5（Embryo day）予以不同計量酒精連續(xù)灌胃，對照組予以等劑量生理鹽水灌胃。收集

3、E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟和新生小鼠及生后一周小鼠心臟。通過檢測血液酒精濃度及H&E染色觀察胚胎心臟大體結(jié)構(gòu)篩選合適酒精灌胃濃度及劑量。應用Westernblot檢測小鼠胚胎心臟發(fā)育H3K9乙?；瘯r序水平及酒精干預對其產(chǎn)生的影響。利用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(quantitative polymerase chain reaction，Q-PCR)檢測酒精干預后心臟發(fā)育相關基因Gata

4、4、Mef2c、Nkx2.5 mRNA表達水平的改變。
　　結(jié)果:
　　1.血液酒精濃度顯示，10ul/g/d酒精灌胃40分鐘后血液酒精濃度為348.15±77.49 mg/100ml，高于2.5ul/g/d(46.42±14.24)及5ul/g/d(154.92±41)劑量組，而15 ul/g/d劑量灌胃可導致孕鼠流產(chǎn)率增高(4/5)，因此選擇10ul/g/d濃度劑量進行后續(xù)實驗。
　　2.H&E染色顯示酒精干預可以

5、導致小鼠胚胎心臟心肌發(fā)育不良，心室腔增大，室間隔肌部變薄。未見解剖結(jié)構(gòu)畸形。
　　3.Western blot結(jié)果顯示胎鼠心臟發(fā)育期間，組蛋白H3K9乙酰化水平于發(fā)育早期(E11.5)開始升高，E17.5達到高峰并維持至出生前，于新生時期迅速下降，生后一周仍維持在較低水平，E17.5較E11.5、新生期及生后一周均存在統(tǒng)計學差異(p＜0.05)。酒精干預致E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟組蛋白H3K9乙酰化水