孕期酒精暴露致小鼠胚胎心臟組蛋白H3K9高乙?；c心臟發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)紊亂.pdf

1、目的:
　　孕期飲酒可以導(dǎo)致胎兒酒精綜合征，其中先天性心臟病(Congenitalheart diseases)為常見(jiàn)伴發(fā)畸形之一，目前其內(nèi)在機(jī)制仍不明確。本課題組前期研究發(fā)現(xiàn)組蛋白乙?；揎椀母淖兡軌蚋蓴_心臟發(fā)育核心轉(zhuǎn)錄因子的表達(dá)，同時(shí)阻礙間充質(zhì)干細(xì)胞向心肌樣細(xì)胞分化，而乙醇及其代謝產(chǎn)物可以選擇性的升高心肌祖細(xì)胞CP15-13(Cardiac progenitorcells15-13)組蛋白H3第九位賴氨酸(H3 Lysine9

2、，H3K9)乙?；郊靶呐K發(fā)育相關(guān)基因表達(dá)。推測(cè)此可能為酒精致心臟發(fā)育畸形的機(jī)制之一。本研究通過(guò)構(gòu)建酒精致胚胎心臟發(fā)育異常小鼠動(dòng)物模型，在體內(nèi)水平探討孕期酒精暴露所致胚胎心臟發(fā)育異常的表觀遺傳機(jī)制，為該疾病發(fā)病機(jī)制的探尋提供全新思路。
　　材料與方法:
　　選取雌性昆明小鼠，受孕后分組飼養(yǎng)，實(shí)驗(yàn)組于小鼠孕期心臟發(fā)育時(shí)間窗E7.5-E15.5（Embryo day）予以不同計(jì)量酒精連續(xù)灌胃，對(duì)照組予以等劑量生理鹽水灌胃。收集

3、E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟和新生小鼠及生后一周小鼠心臟。通過(guò)檢測(cè)血液酒精濃度及H&E染色觀察胚胎心臟大體結(jié)構(gòu)篩選合適酒精灌胃濃度及劑量。應(yīng)用Westernblot檢測(cè)小鼠胚胎心臟發(fā)育H3K9乙?；瘯r(shí)序水平及酒精干預(yù)對(duì)其產(chǎn)生的影響。利用基于SYBR GREENⅠ的熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)(quantitative polymerase chain reaction，Q-PCR)檢測(cè)酒精干預(yù)后心臟發(fā)育相關(guān)基因Gata

4、4、Mef2c、Nkx2.5 mRNA表達(dá)水平的改變。
　　結(jié)果:
　　1.血液酒精濃度顯示，10ul/g/d酒精灌胃40分鐘后血液酒精濃度為348.15±77.49 mg/100ml，高于2.5ul/g/d(46.42±14.24)及5ul/g/d(154.92±41)劑量組，而15 ul/g/d劑量灌胃可導(dǎo)致孕鼠流產(chǎn)率增高(4/5)，因此選擇10ul/g/d濃度劑量進(jìn)行后續(xù)實(shí)驗(yàn)。
　　2.H&E染色顯示酒精干預(yù)可以

5、導(dǎo)致小鼠胚胎心臟心肌發(fā)育不良，心室腔增大，室間隔肌部變薄。未見(jiàn)解剖結(jié)構(gòu)畸形。
　　3.Western blot結(jié)果顯示胎鼠心臟發(fā)育期間，組蛋白H3K9乙?；接诎l(fā)育早期(E11.5)開(kāi)始升高，E17.5達(dá)到高峰并維持至出生前，于新生時(shí)期迅速下降，生后一周仍維持在較低水平，E17.5較E11.5、新生期及生后一周均存在統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(p＜0.05)。酒精干預(yù)致E11.5、E14.5、E17.5及E18.5胚胎心臟組蛋白H3K9乙?；?/p>