甘草酸單銨鹽對奶牛脂肪肝細胞模型脂肪沉積的影響及調控作用初步研究.pdf

1、奶牛脂肪肝是圍產期發(fā)病率較高的營養(yǎng)代謝性疾病。奶牛脂肪肝常會造成奶牛產奶量下降，誘發(fā)皺胃變位、胎衣不下甚至產后癱瘓等疾病，而且該病治療成本較高。這嚴重影響我國奶牛養(yǎng)殖業(yè)的健康發(fā)展。研究奶牛脂肪肝發(fā)病機制，為有效預防和治療脂肪肝病提供理論依據成為奶牛業(yè)當務之急。本研究通過油酸鈉誘導原代奶牛肝細胞建立脂肪肝細胞模型，并探討了甘草酸單銨鹽（Monoammonium glycyrrhizinate，MAG）對脂肪肝細胞模型和蛋雞肝臟脂肪沉積的影

2、響。
　　1、油酸鈉建立脂肪肝模型濃度和時間的篩選使用不同濃度的油酸鈉（0，0.1，0.25，0.5，1 mMol/L）對原代培養(yǎng)的犢牛肝細胞作用12 h發(fā)現，當油酸鈉濃度為0.25 mMol/L時，即可出現肝細胞損傷；油紅 O染色出現脂肪肝細胞標志性的指環(huán)狀細胞；通過透射電鏡觀察可見模型組中線粒體空泡化嚴重，糖原顆粒較少，說明油酸鈉在誘導刺激奶牛肝細胞12 h的情況下，采用0.25 mMol/L濃度的油酸鈉為最佳建模濃度。采用0

3、.25 mMol/L濃度的油酸鈉對原代肝細胞作用不同時長（0、3、6、9、12、24 h），發(fā)現在誘導9 h肝細胞可出現肝細胞損傷及油紅 O染色出現脂肪肝細胞標志性的指環(huán)狀細胞，確定0.25 mMol/L的油酸鈉在誘導刺激奶牛肝細胞9h的情況下可作為建立體外奶牛脂肪肝細胞模型的最佳條件。
　　2、MAG對體外細胞模型的影響使用0.25 mg/L的MAG對原代肝細胞預處理12 h，再使用建模最佳條件進行誘導，發(fā)現MAG能夠提高肝細胞

4、活性，減少肝損傷，降低細胞內脂質的沉積，下調脂合成關鍵基因 ChREBP、脂代謝關鍵基因 PPARα、脂質轉運相關基因 MTP。這些都說明 MAG能緩解細胞模型的脂質沉積、降低脂代謝關鍵基因來延緩細胞內脂質過氧化過程，降低了主要氧化場所線粒體的功能負擔，從而降低了細胞損傷程度達到保護肝臟細胞的作用。
　　3、MAG對蛋雞血脂及肝脂沉積的影響使用不同濃度的MAG（0、25、50、100、200 mg/L）作為飲水添加劑供蛋雞飲用21

5、d后，發(fā)現血清中 TG含量較對照組顯著下降（P＜0.05），但下降趨勢并未隨加藥濃度而改變，表明 MAG能夠改善血液中的甘油三酯（Triglyceride,TG)水平。血清中葡萄糖（Glucose， GLU）、總膽固醇（Cholesterol,CHOL）與對照組無顯著差異。血清中ALT的量較對照組顯著下降，表明MAG能夠對肝臟起到保護作用，減少肝臟細胞損傷。
　　綜上所述，使用油酸鈉建立體外模型最佳條件為0.25 mMol/L油酸