不同治法方藥對脂肪肝肝細胞信號轉(zhuǎn)導調(diào)控機制影響的實驗研究.pdf

1、目的：探討疏肝、健脾、活血、祛濕、綜合等中醫(yī)不同治法方藥對脂肪肝大鼠肝細胞信號轉(zhuǎn)導通路的影響，比較不同治法方藥防治脂肪肝作用的差異并揭示其作用機制。 方法：利用高脂飼料喂養(yǎng)、白酒灌胃復制大鼠脂肪肝動物模型，同時給予疏肝、健脾、活血、祛濕、綜合不同方藥進行干預。12周后處死大鼠，檢測血清中TC、TG、ALT、AST等含量；取肝組織，觀察其病理形態(tài)學的變化；應用免疫組織化學方法檢測NF-кB<'65><,P>在各組肝組織中的表達；分

2、離肝Kupffer細胞，采用Western blot方法檢測大鼠Kupffer細胞MAPKs通路中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達及磷酸化水平；用RT—PCR方法檢測Kupffer細胞中CD14mRNA的表達。 結果： 1.模型組大鼠血清TC、TG、ALT和AST均較正常對照組升高(P<0.05)。各用藥組TC、TG、ALT、ASI、含量與模型組比較均有下降，以疏肝組、健脾組下降最為顯著(P<0.05)。

3、 2．光鏡觀察：模型組大鼠肝組織呈中度至重度肝細胞脂肪變性，肝細胞增大，胞漿內(nèi)脂滴大小不一，細胞水腫嚴重，匯管區(qū)炎細胞浸潤明顯，有較多灶性纖維增生，與正常組比較有顯著性差異(P<0.05)，提示脂肪肝模型復制成功。健脾組、疏肝組肝細胞脂肪變性與模型組比較均有顯著性差異(P<0.05)，表明健脾法、疏肝法有抗脂肪肝的作用。祛濕組、活血組、綜合組大鼠肝細胞脂肪變與模型組比較雖有改善的趨勢，但無統(tǒng)計學意義(P>0.05)。 3．電

4、鏡觀察：模型組大鼠肝細胞內(nèi)出現(xiàn)大量脂滴，線粒體腫脹，嵴排列紊亂，內(nèi)質(zhì)網(wǎng)腫脹。健脾組、疏肝組肝細胞結構接近正常，含少量脂滴，細胞核、線粒體、粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)結構正常。其他各用藥組超微結構改變情況介于模型組和疏肝組、健脾組之間。 4．對肝Kupffer細胞CD14 mRNA和肝組織NF-кB<'65><,P>表達的影響：疏肝、健脾治法及方藥可顯著抑制肝組織NF-кB<'65><,P>表達，健脾方藥能顯著降低Kupffer細胞CD14 mR

5、NA的表達。 5．肝Kupffer細胞中ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性的變化：模型組大鼠Kupffer細胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達及磷酸化水平顯著增加，各用藥干預組大鼠Kupffer細胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白表達及磷酸化水平顯著降低，其中以健脾組、疏肝組下降最為顯著。 1．飲食不節(jié)、勞逸失度是脂肪肝的主要病因，肝、脾功能失調(diào)是脂肪肝的基本病機。 2．健脾法、疏肝

6、法具有顯著抗脂肪肝作用，是防治脂肪肝的重要治法。 3．健脾、疏肝治法及方藥可能通過調(diào)節(jié)脂質(zhì)代謝、減輕肝臟脂肪變性、保護肝細胞、減輕肝細胞炎癥反應、改善肝功能等發(fā)揮防治脂肪肝的作用。 4．健脾、疏肝治法及方藥抑SUTH~肪肝大鼠肝組織NF=KB<'65><,P>的表達，降低Kupffer細胞ERK1/2、JNK和p38MAPK蛋白活性及其磷酸化水平，可能是防治脂肪肝的主要作用機制之一。當然，其防治脂肪肝可能是多途徑、多層次