食管鱗癌患者血清miRNA-7、miRNA-24與臨床特征及放化療敏感相關(guān)性的研究.pdf

1、本文從以下幾方面進(jìn)行論述：
　　第一部分 食管鱗癌患者血清microRNA-7與臨床特征及放化療敏感相關(guān)性的研究
　　目的:探討漢族人群食管鱗癌患者血清microRNA-7表達(dá)與臨床特征及放化療敏感性之間的相關(guān)性，并在細(xì)胞水平上對(duì)其相關(guān)分子機(jī)制作初步探討。
　　方法:2012年10月至2013年4月，山東省腫瘤醫(yī)院放療科收治的105例未行手術(shù)治療的臨床組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證斷為胸段食管鱗癌納入本研究。留取患者治療前血清標(biāo)

2、本，提取血清總RNA，進(jìn)行TaqMan探針法RT-PCR檢測各標(biāo)本中microRNA-7的含量，并對(duì)結(jié)果與臨床特征及放化療敏感性之間的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并在此基礎(chǔ)上，在細(xì)胞水平上對(duì)其可能的分子機(jī)制作初步探討。研究的終點(diǎn)指標(biāo)是2周期同步放化療結(jié)果后評(píng)價(jià)放化療療效。統(tǒng)計(jì)分析中，用Student檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)分析臨床因素之間的差異。臨床因素等計(jì)數(shù)參數(shù)與血清microRNA-7的表達(dá)采用卡方的Fisher精確檢驗(yàn);放療療效與microRNA-

3、7的相關(guān)性采用單因素和多因素分析，計(jì)算相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比(HR)及95％可信區(qū)間。P值＜0.05被認(rèn)為有顯著性差異，所有檢驗(yàn)均為雙邊模式。食管鱗癌診斷采用ROC曲線評(píng)估預(yù)測的靈敏度和特異度，曲線下面積值來判斷預(yù)測的準(zhǔn)確性。采用SPSSStatistics17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:納入本研究的105例患者，其中男性69例，女性36例，中位年齡60歲，其中胸上段食管癌患者30例，胸中段食管癌患者60例，胸下段食管癌患者15例。

4、腫瘤長度≦4.0cm的患者有53例，32例患者腫瘤長度為4.1-6.0cm，20例患者的腫瘤長度＞6.0cm.病理顯示，高分化患者24例，54例患者中分化，27例為低分化。在總的105例胸段食管癌患者中，有53例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移，80例發(fā)現(xiàn)有遠(yuǎn)處轉(zhuǎn)移。CYFRA21-1和CEA水平分別以3.3ng/ml和3.4ng/ml為界值分為高表達(dá)和低表達(dá)。此外，入組的30例健康志愿者的血清，其中17例男性，13例女性，平均年齡為62歲。本研究納入的所

5、有患者在接受同步放化療后根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，5例獲CR，57例PR，20例SD，以及23例有PD。CR和PR歸為“放射敏感組”，將SD和PD歸為“放射抗拒組”。用2-ΔΔCt法表示相對(duì)定量結(jié)果，健康對(duì)照組（30例）的血清miR-7是食管鱗癌患者(105例)的4.74倍(P＜0.01)，是放療敏感組的3.35倍(P＜0.01)，是放療抗拒組的7.84倍(P＜0.01)，提示其在食管癌診斷和食管癌放化療敏感性預(yù)測方面的潛在價(jià)值

6、。此外，我們以中位值為界，miR-7分為高表達(dá)、低表達(dá)，并以此為基礎(chǔ)對(duì)其與臨床特征進(jìn)行相關(guān)分析，發(fā)現(xiàn):miR-7的表達(dá)與性別和年齡無相關(guān)性，但與腫瘤長度和淋巴結(jié)狀態(tài)關(guān)系密切。腫瘤越長，microRNA-7表達(dá)越低(P＜0.05);淋巴結(jié)陽性患者表達(dá)更容易偏低(P＜0.05).我們將real-time PCR實(shí)驗(yàn)得到的miR-7的Ct值與腫瘤長度的關(guān)系進(jìn)行相關(guān)性分析。結(jié)果顯示兩者之間有相關(guān)性的(Pearman r=0.489，P＜0.01

7、)。而有關(guān)CRT療效與患者臨床特征之間的關(guān)系統(tǒng)計(jì)得出:療效與CEA(P＜0.05)，Cyfra21-1(P＜0.05)，血清miR-7水平(P＜0.05)，以及骨髓抑制(P＜0.01)關(guān)系密切。多因素Logist回歸也提示，ESCC患者療效受以上幾個(gè)因素的影響:Cyfra21-1(P=0.038,OR=0.296,95％CI for OR=0.094-0.934),CEA(P=0.022,OR=0.276,95％CI for OR=0.

8、091-0.833),miR-7(P=0.019,OR=0.265,95％CI for OR=0.087-0.800)，骨髓抑制(P=0.000，OR=3.347，95％CI for OR=1.737-6.449)。miR-7轉(zhuǎn)染ECA-109細(xì)胞后72小時(shí)，Western blot檢測各組細(xì)胞中EGFR蛋白的表達(dá)水平顯示:與mimic陰性對(duì)照組相比，miR-7mimic轉(zhuǎn)染組的ECA-109細(xì)胞中EGFR蛋白表達(dá)水平降低;與inhib

9、itor陰性對(duì)照組相比，miR-7inhibitor轉(zhuǎn)染組的ECA-109細(xì)胞中EGFR蛋白表達(dá)水平升高。總結(jié):治療前血清中microRNA-7表達(dá)水平對(duì)食管鱗癌具有潛在的診斷價(jià)值及治療敏感性的預(yù)測價(jià)值，治療前血清中低水平的Cyfra21-1和CEA、高表達(dá)的miR-7，以及骨髓抑制毒性嚴(yán)重的食管癌患者對(duì)放化療更容易敏感。MicroRNA-7的放療敏感預(yù)測可能是通過抑制其下游蛋白EGFR的表達(dá)來實(shí)現(xiàn)的。
　　第二部分 食管鱗癌患者

10、血清microRNA-24與臨床特征及放化療敏感相關(guān)性的研究
　　目的:探討漢族人群食管鱗癌患者血清microRNA-24表達(dá)與臨床特征及放化療敏感性之間的相關(guān)性，并在細(xì)胞水平上對(duì)其相關(guān)分子機(jī)制作初步探討。
　　方法:2012年10月至2013年4月，山東省腫瘤醫(yī)院放療科收治的105例未行手術(shù)治療的臨床組織病理學(xué)或細(xì)胞學(xué)證斷為胸段食管鱗癌納入本研究。留取患者治療前血清標(biāo)本，提取血清總RNA，進(jìn)行TaqMan探針法RT-PCR

11、檢測各標(biāo)本中microRNA-24的含量，并對(duì)結(jié)果與臨床特征及放化療敏感性之間的相關(guān)性進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。并在此基礎(chǔ)上，在細(xì)胞水平上對(duì)其可能的分子機(jī)制作初步探討。研究的終點(diǎn)指標(biāo)是2周期同步放化療結(jié)果后評(píng)價(jià)放化療療效(CR、PR、SD、PD)。統(tǒng)計(jì)分析中，用Student檢驗(yàn)或卡方檢驗(yàn)分析臨床因素之間的差異。臨床因素等計(jì)數(shù)參數(shù)與血清microRNA-24的表達(dá)采用卡方的Fisher精確檢驗(yàn);放療療效與microRNA-24的相關(guān)性采用單因素和多

12、因素分析，計(jì)算相應(yīng)的風(fēng)險(xiǎn)比(HR)及95％可信區(qū)間。P值＜0.05被認(rèn)為有顯著性差異，所有檢驗(yàn)均為雙邊模式。食管鱗癌診斷采用ROC曲線評(píng)估預(yù)測的靈敏度和特異度，曲線下面積值來判斷預(yù)測的準(zhǔn)確性。采用SPSS Statistics17.0軟件包進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果:納入本研究的105例患者，除第一部分所述，有吸煙史患者50例，飲酒史患者40例，家族史患者24例，CYFRA21-1和CEA水平分別以3.3ng/ml和3.4ng/ml

13、為界值分為高表達(dá)和低表達(dá)，有低水平Cyfra21-1和CEA的食管鱗癌患者分別為68例和74例。治療過程中骨髓抑制毒性分級(jí)，0度患者30例，1度患者40，2度患者25例，3度患者8例，4度骨髓抑制毒性的患者有2例。本研究納入的所有患者在接受同步放化療后根據(jù)RECIST標(biāo)準(zhǔn)進(jìn)行療效評(píng)價(jià)，5例獲CR，57例PR，20例SD，以及23例有PD。CR和PR歸為“放射敏感組”，將SD和PD歸為“放射抗拒組”。用2-ΔΔCt法表示相對(duì)定量結(jié)果，食管

14、鱗癌患者（105例）的血清miR-24是健康對(duì)照組（30例）的4.82倍(P＜0.01)，放療敏感組患者（62例）的血清miR-24是放療抗拒組患者（43例）的2.05倍(P＜0.01)，提示其在食管鱗癌診斷和放化療敏感性預(yù)測方面的潛在價(jià)值。以中位Ct值為界，miR-24分為高表達(dá)、低表達(dá)，統(tǒng)計(jì)得出，臨床收集資料中各因素與血清microRNA-24的表達(dá)并無相關(guān)性（所有P值均＞0.05）。CRT療效與患者臨床特征之間的關(guān)系。如表所示，療

15、效與CEA(P＜0.05)，Cyfra21-1(P＜0.05)，血清miR-24水平(P＜0.05)，以及骨髓抑制(P＜0.01)關(guān)系密切。多因素Logist回歸也提示，ESCC患者療效受以上幾個(gè)因素的影響:Cyfra21-1(P=0.018，OR=0.253，95％CI for OR=0.081-0.794),miR-24(P=0.011,OR=0.240,95％CI for OR=0.079-0.723)，骨髓抑制(P=0.000，

16、OR=3.134，95％CI for OR=1.677-5.856)。miR-24轉(zhuǎn)染ECA-109細(xì)胞后72小時(shí)，Western blot檢測各組細(xì)胞中H2AX蛋白的表達(dá)水平。結(jié)果顯示:與mimic陰性對(duì)照組相比，miR-24mimic轉(zhuǎn)染組的ECA-109細(xì)胞中H2AX蛋白表達(dá)水平降低;與inhibitor陰性對(duì)照組相比，miR-24inhibitor轉(zhuǎn)染組的ECA-109細(xì)胞中H2AX蛋白表達(dá)水平升高。
　　結(jié)論:治療前血清