RSK4與p63在食管鱗癌中的表達及其與患者臨床病理特征的相關(guān)性研究.pdf

1、背景：
　　食管癌（esophageal carcinoma，EC）是食管上皮組織的惡性腫瘤，發(fā)病年齡多在40歲以上，男女比約為2~4：1。食管癌全球每年發(fā)病約50萬例，在所有惡性腫瘤中占2％；年死亡約40萬例，居全球癌癥死亡例數(shù)的第6位。國內(nèi)食管癌發(fā)病率占全球50%以上，患者5年生存率不到10％。在食管癌發(fā)生的高危區(qū)，鱗狀細胞癌是主要的組織學(xué)類型，在癌癥死因中居第七位。食管鱗癌患者病死率高，預(yù)后不良，手術(shù)風(fēng)險較大，并且缺乏特異性

2、的診斷及預(yù)后評估指標(biāo)。食管鱗癌的發(fā)病機制目前仍不十分清楚。
　　1999年由Yntema等發(fā)現(xiàn)的核糖體S6激酶4（p90 ribosomal protein S6 kinase4，RSK4）是核糖體S6蛋白激酶（RSK）基因家族成員之一，其定位于人類Xq21位點，具有 X染色體連鎖基因的特性，處于Ras-MAPKs信號傳導(dǎo)途徑的下游，是MAPK/ERK激酶途徑中最重要的下游調(diào)控因子及Ras通路中重要的信號傳遞分子。RSK4作為一類

3、絲氨酸/蘇氨酸蛋白激酶，參與細胞周期調(diào)控，影響細胞的增殖、分化及凋亡。據(jù)文獻報道，RSK4在結(jié)腸癌、腎細胞癌、乳腺癌、子宮內(nèi)膜癌等腫瘤中存在異常表達，提示其與腫瘤的發(fā)生、發(fā)展相關(guān)聯(lián)。然而，目前對于RSK4與食管癌的相關(guān)研究尚未見報道。p63于1998年由Yang等首次發(fā)現(xiàn)，其與p53和p73的基因序列及功能具有很高的同源性。有研究表明，p63在細胞生物學(xué)上與腫瘤的發(fā)生有關(guān)，在浸潤性腫瘤中，由于基底層細胞或肌上皮細胞的缺失，p63表達往往

4、缺失。大量實驗證據(jù)表明，p63在外胚層分化發(fā)展和復(fù)層上皮祖細胞的維護中扮演重要角色，其與p53的抑癌功能相反，許多鱗癌組織細胞伴有p63的過表達，提示p63可能是一個潛在的致癌基因。最新研究發(fā)現(xiàn)，p63基因敲除小鼠的皮膚鱗狀上皮細胞RSK4表達下調(diào)，提示在鱗狀上皮中兩者可能有一定相關(guān)性。
　　另外，本課題組前期發(fā)現(xiàn)，RSK4在腎細胞癌及胰腺癌中表達高于相應(yīng)的正常組織，提示其可能具有癌基因的功能。然而，目前RSK4與p63在食管鱗癌

5、中的表達情況及其與食管鱗癌的進展關(guān)系尚不清楚，這正是本課題著眼的研究內(nèi)容。
　　目的：
　　本研究運用組織病理學(xué)及分子生物學(xué)方法，明確RSK4及p63的表達與食管鱗癌患者臨床病理特征和預(yù)后的關(guān)系，并初步探討其作為潛在的食管鱗癌惡性進展的分子標(biāo)志及預(yù)后評估因子的可能，研究RSK4與p63及其相互關(guān)系，將有助于探討食管鱗癌的發(fā)生發(fā)展機制，為其臨床早期診斷、治療以及預(yù)后評估提供一定的理論依據(jù)。
　　方法：
　　1．利用

6、免疫組織化學(xué)Envision兩步法，對72例食管鱗癌組織中RSK4及p63的蛋白表達及兩者相關(guān)性進行研究。
　　2．qRT-PCR：從食管鱗癌細胞系及正常食管細胞中提取mRNA，進一步反轉(zhuǎn)錄為cDNA，采用qRT-PCR檢測其RSK4及p63 mRNA的表達水平。
　　3．Western blot：從食管鱗癌細胞系及正常食管細胞中提取蛋白，定量后進行SDS-PAGE電泳，轉(zhuǎn)膜后孵育一抗及二抗，最后通過ECL化學(xué)發(fā)光檢測RSK

7、4和p63的蛋白表達情況。
　　4．統(tǒng)計學(xué)處理：應(yīng)用SPSS19.0軟件中的卡方檢驗、Kaplan-Meier法及Cox風(fēng)險回歸模型分別進行相關(guān)性分析和生存分析，研究食管鱗癌組織中RSK4及p63的表達與患者臨床病理特征的相關(guān)性，并探索其與預(yù)后的關(guān)系。
　　結(jié)果：
　　1．食管鱗癌與癌旁組織中RSK4和p63的表達與分布
　　免疫組織化學(xué)染色結(jié)果發(fā)現(xiàn)RSK4及p63在食管鱗癌組織中的表達高于腫瘤周圍組織。

8、　　2．RSK4與p63在食管鱗癌組織中的表達及相關(guān)性分析
　　72例食管鱗癌組織中RSK4陽性表達率為62.5％（45/72），而p63陽性表達率為83.3％（60/72）。RSK4和p63均為陽性的有42例，均為陰性的有9例，經(jīng)Pearson相關(guān)分析，RSK4與p63的表達呈正相關(guān)。
　　3．RSK4與p63在食管鱗癌細胞系中的表達水平
　　檢測RSK4及p63 mRNA水平和蛋白水平在食管鱗癌細胞系中的表達較正常

9、食管細胞高，并且不同食管鱗癌細胞系之間的RSK4及p63的表達水平各不相同。
　　4．食管鱗癌組織RSK4的表達與臨床病理特征的關(guān)系
　　72例食管鱗癌組織中，RSK4表達陽性共有45例（45/72，62.5％）。分析RSK4表達與其中66例手術(shù)患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)果顯示：pT1～pT2期陽性率為48.3％（14/29），pT3～pT4期陽性率為73.0％（27/37），隨著臨床病理分期的增高，RSK4陽性率明顯升高，

10、且兩者RSK4表達差異具有統(tǒng)計學(xué)意義，即RSK4陽性表達與腫瘤的pT分期具有顯著相關(guān)性。另外，RSK4的表達與分化程度以及淋巴轉(zhuǎn)移有關(guān)。然而，RSK4的表達水平與患者其他幾項臨床病理特征（性別、年齡、腫瘤大小、大體分型等）無統(tǒng)計學(xué)意義。
　　5．食管鱗癌組織中p63的表達與臨床病理特征的關(guān)系
　　72例食管鱗癌組織中，p63表達陽性共有60例（60/72，83.8％）。分析p63表達與其中66例手術(shù)患者臨床病理特征的關(guān)系，結(jié)

11、果顯示：pT1～pT2期陽性率為75.9%（22/29），而pT3～pT4期陽性率為89.2％（33/37），且兩者p63的表達差異無統(tǒng)計學(xué)意義。此外，p63的表達水平與患者其他幾項臨床病理特征（性別、年齡、腫瘤大小、大體分型、有無淋巴轉(zhuǎn)移等）也無相關(guān)關(guān)系。
　　6．RSK4及p63與食管鱗癌患者生存預(yù)后的關(guān)系
　　單因素生存及多因素生存分析結(jié)果顯示，RSK4陽性表達與食管鱗癌患者不良預(yù)后具有相關(guān)性，且分期、分化程度、有無淋

12、巴結(jié)轉(zhuǎn)移等因素均可影響食管鱗癌患者的生存期，而吸煙、大體分型與其預(yù)后不存在相關(guān)關(guān)系。統(tǒng)計結(jié)果發(fā)現(xiàn)，p63陽性表達及各項臨床病理特征均與食管鱗癌的預(yù)后無關(guān)。
　　結(jié)論：
　　本研究發(fā)現(xiàn)RSK4及p63在食管鱗癌組織及細胞系中的表達明顯上調(diào)，并且RSK4與食管鱗癌患者的pT分期、分化程度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、生存預(yù)后之間存在顯著相關(guān)，而 p63與上述指標(biāo)無相關(guān)性，提示RSK4可能作為潛在的食管鱗癌惡性進展的分子標(biāo)志及預(yù)后評估因子，為進一