LC3A在食管鱗癌中的放化療敏感性預(yù)測(cè)作用.pdf

1、第一部分微管相關(guān)蛋白LC3A在食管鱗癌中的表達(dá)及意義
　　 研究背景及目的:自噬是指細(xì)胞內(nèi)需降解的長(zhǎng)壽命蛋白質(zhì)和細(xì)胞器等胞漿成分被包裹，并運(yùn)送至溶酶體降解的過(guò)程，自噬性降解產(chǎn)生的氨基酸和其他一些小分子物質(zhì)可被循環(huán)利用或產(chǎn)生能量。巨自噬即通常所指自噬。自噬從酵母到人是高度保守的。自噬這一從酵母到哺乳動(dòng)物高度保守細(xì)胞死亡方式的基礎(chǔ)作用在于維持細(xì)胞內(nèi)環(huán)境穩(wěn)定，但在生長(zhǎng)因子缺乏、非折疊蛋白聚集、營(yíng)養(yǎng)缺乏等不良刺激下，自噬作用被誘導(dǎo)增強(qiáng)。

2、自噬常常作為不良應(yīng)激的反應(yīng)機(jī)制發(fā)揮有利于細(xì)胞存活的保護(hù)作用。大量研究已證實(shí)自噬參與了腫瘤發(fā)生、發(fā)展，其在腫瘤治療中的作用越來(lái)越受到重視。目前研究發(fā)現(xiàn)自噬在腫瘤細(xì)胞“存與亡”中發(fā)揮著重要作用，但腫瘤細(xì)胞自噬激活后導(dǎo)致完全不同的結(jié)果，有時(shí)導(dǎo)致腫瘤細(xì)胞存活，而有時(shí)促進(jìn)腫瘤細(xì)胞死亡，其原因可能是由于誘導(dǎo)自噬增強(qiáng)的應(yīng)激類(lèi)型的不同和腫瘤類(lèi)型的差異。然而，多數(shù)研究認(rèn)為自噬發(fā)揮著使腫瘤細(xì)胞抵抗不良應(yīng)激，有助于腫瘤細(xì)胞存活的作用。進(jìn)一步研究顯示自噬激活也

3、是腫瘤細(xì)胞抵抗藥物毒性、抵抗電離照射的重要機(jī)制之一。所以，抑制自噬則成為抗腫瘤治療的潛在靶點(diǎn)。微管相關(guān)蛋白輕鏈3(Microtubule-associated protein light chain3，MAPLC3A/LC3A)是自噬體重要組成部分，LC3蛋白在細(xì)胞內(nèi)存在兩種形式:LC3-Ⅰ和它的蛋白水解物L(fēng)C3-Ⅱ，LC3在自噬過(guò)程中發(fā)揮重要作用，其表達(dá)及由LC3-Ⅰ到LC3-Ⅱ的轉(zhuǎn)化與自噬活性相關(guān)，且與腫瘤預(yù)后相關(guān)。LC3有三種亞型

4、，LC3A，LC3B，LC3C。LC3A作為L(zhǎng)C3的重要亞型，被證明是自噬激活的重要標(biāo)志且與肺癌、結(jié)直腸癌等多種腫瘤預(yù)后相關(guān)。LC3A在食管鱗癌(Esophagealsquamous cell carcinoma，ESCC)的表達(dá)及意義未見(jiàn)報(bào)道。該研究通過(guò)分析LC3A在ESCC組織中表達(dá)及其與臨床病理因素、預(yù)后的關(guān)系，旨在探索ESCC預(yù)后指標(biāo)并為制定ESCC個(gè)體化治療提供依據(jù)，進(jìn)一步提高食管鱗癌治療效果。
　　 資料與方法:根據(jù)

5、病案資料選取濱州醫(yī)學(xué)院附屬醫(yī)院2005年1月至2008年12月間收治的食管鱗癌根治術(shù)病例243例。所有患者手術(shù)前未行任何抗腫瘤治療，手術(shù)為根治性手術(shù)。其中Ⅱ/Ⅲ(TanyN+M(0) or T3,4NanyM(0))期患者209例，158例術(shù)后行以放療為主的輔助治療。對(duì)于同步放化療患者，順鉑聯(lián)合氟尿嘧啶(Cisplatin and fluorouracil, DF)方案為同步化療方案。放療/放化療后序貫化療方案包括DF方案和紫杉類(lèi)藥物聯(lián)

6、合順鉑(Taxanes and cisplatin，TP)方案。免疫組化方法(Immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)石蠟包埋腫瘤組織中LC3A及P53蛋白表達(dá)，根據(jù)LC3A蛋白表達(dá)強(qiáng)弱，分為高表達(dá)及低表達(dá)。分析LC3A蛋白在ESCC中表達(dá)模式及其與重要自噬凋亡共同調(diào)節(jié)基因p53蛋白表達(dá)關(guān)系，以及LC3A表達(dá)在ESCC臨床病理因素及預(yù)后中的作用。
　　 結(jié)果:1.LC3A在食管鱗癌組織中呈現(xiàn)胞漿內(nèi)彌漫性表達(dá)，LC3

7、A陽(yáng)性率為52.7％。
　　 2.LC3A表達(dá)與年齡、性別、體重減輕及腫瘤位置、腫瘤侵犯深度、分期及淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移無(wú)明顯相關(guān)性。
　　 3.LC3A與p53蛋白在ESCC中表達(dá)為獨(dú)立事件，無(wú)關(guān)聯(lián)性(p=0.9772)。
　　 4.LC3A低表達(dá)ESCC組3、5年局部控制率分別為58.2、47.0％，而LC3A高表達(dá)組3、5年局部控制率則分別為46.1％、39.5％。LC3A低表達(dá)組與高表達(dá)局部控制率差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(

8、p=0.082)，但LC3A低表達(dá)組局部控制率有高于LC3A高表達(dá)組傾向。
　　 5.LC3A低表達(dá)組3、5年總生存率分別為49.2％、30.5％, LC3A高表達(dá)組3、5年總生存率分別為41.7％、26.5％，LC3A表達(dá)同預(yù)后無(wú)關(guān);COX單因素及多因素分析顯示T分期、N分期、臨床分期、手術(shù)根治性及術(shù)后輔助治療與預(yù)后相關(guān)，LC3A非獨(dú)立預(yù)后因素。
　　 6.將243例患者中209例Ⅱ/Ⅲ期(TanyN+M(0) or

9、T3,4NanyM(0))患者進(jìn)行亞組分析發(fā)現(xiàn)，對(duì)于未行術(shù)后放療51例患者，LC3A高低表達(dá)兩組預(yù)后差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。而對(duì)于158例行術(shù)后放療為主輔助治療者，LC3A低表達(dá)者預(yù)后明顯優(yōu)于LC3A高表達(dá)者(p＜0.05)。158例術(shù)后行放療為主輔助治療Ⅱ/Ⅲ期病例進(jìn)一步亞組分析發(fā)現(xiàn)， LC3A High+RT組局部控制率低于LC3A Low+RT組，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p=0.01)。
　　 結(jié)論:LC3A在ESCC組織中呈彌漫胞漿

10、表達(dá)，其表達(dá)與浸潤(rùn)深度、淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移情況及分期無(wú)關(guān)。放療為主的術(shù)后輔助治療在LC3A低表達(dá)患者中獲益更大，其局部控制率及總生存率高于LC3A高表達(dá)ESCC，提示LC3A表達(dá)水平與術(shù)后放療療效相關(guān)。
　　 第二部分DC方案聯(lián)合放療治療非手術(shù)ESCC療效評(píng)價(jià)及微管相關(guān)蛋白LC3A對(duì)放化療敏感性的預(yù)測(cè)作用
　　 研究背景及目的:食管癌為最常見(jiàn)惡性腫瘤之一，其發(fā)病率高，預(yù)后差。包括我國(guó)在內(nèi)的發(fā)展中國(guó)家中，食管癌更為常見(jiàn)，我國(guó)每年大

11、約15萬(wàn)人死于食管癌，占世界食管癌死亡病例40％以上。早期食管癌給以根治性手術(shù)后可以獲得較好的預(yù)后，而對(duì)于多數(shù)中晚期食管癌患者而言，單純手術(shù)5年生存率僅20％左右。同步放化療是非手術(shù)局部晚期食管癌標(biāo)準(zhǔn)治療模式。作為治療非手術(shù)食管癌的重要初始治療手段，其5年生存率僅為30％左右，局部復(fù)發(fā)為最常見(jiàn)治療失敗原因，局部未控和復(fù)發(fā)率高達(dá)20-80％。且單一提高放射治療劑量并未改善患者預(yù)后，優(yōu)化同步化療方案是進(jìn)一步提高療效的重要途徑。近年來(lái)基于第三

12、代化療藥物作為同步化療方案的治療模式得到逐步探索。研究已初步證實(shí)紫杉類(lèi)聯(lián)合鉑類(lèi)作為同步化療方案治療食管癌的可行性，初步研究顯示有效，但耐受性不一，故化療藥物劑量及用法尚需進(jìn)一步探討。同一部位腫瘤，甚至相同分化程度、相同組織來(lái)源腫瘤對(duì)于放化療敏感性存在差異，說(shuō)明腫瘤細(xì)胞內(nèi)在分子生物學(xué)特性影響了放射敏感性。腫瘤生物學(xué)行為預(yù)測(cè)指標(biāo)是目前腫瘤研究的熱點(diǎn)之一。盡管控制食管癌發(fā)病、決定其生物學(xué)行為的具體基因及確切機(jī)制尚未明確，但大量研究已證實(shí)涉及細(xì)

13、胞周期調(diào)節(jié)、凋亡、DNA損傷修復(fù)機(jī)制、生長(zhǎng)因子的許多基因突變及表達(dá)異常與腫瘤發(fā)生、發(fā)展密切有關(guān)，如p53、p21、Cyclin D、BRCA1、HIF-1等。近年來(lái)，自噬在食管鱗癌中的作用備受關(guān)注。體外實(shí)驗(yàn)研究顯示抑制自噬功能，能夠提高食管鱗癌細(xì)胞的放射敏感性，證實(shí)自噬在腫瘤細(xì)胞抵抗照射中起到保護(hù)腫瘤細(xì)胞的作用。研究顯示LC3A作為重要自噬相關(guān)蛋白，在包括肺癌、結(jié)直腸癌在內(nèi)多種腫瘤中廣泛高表達(dá)，且與腫瘤預(yù)后相關(guān)。第一部分研究發(fā)現(xiàn)微管相關(guān)

14、蛋白LC3A高表達(dá)食管鱗癌患者術(shù)后放化療/放療后局部控制率低于LC3A低表達(dá)者，提示LC3A表達(dá)同食管癌對(duì)放化療敏感性有關(guān)。該部分旨在通過(guò)研究LC3A表達(dá)與食管鱗狀細(xì)胞癌放化療療效之間的關(guān)系，探索LC3A蛋白表達(dá)在食管鱗癌放化療敏感性中的作用。同時(shí)觀察多西他賽順鉑(Docetaxel and cisplatin，DC)方案小劑量多次化療聯(lián)合放療治療食管鱗癌的可行性。
　　 資料與方法:自2011年11月至2012年10月，濱州醫(yī)

15、學(xué)院附屬醫(yī)院腫瘤科收治非手術(shù)食管癌患者65例。所有入組患者胃鏡活檢病理確診為食管鱗癌，KPS評(píng)分不小于80分，無(wú)手術(shù)指證或者患者拒絕手術(shù)，且無(wú)放化療禁忌。根據(jù)中國(guó)非手術(shù)治療食管癌臨床分期專(zhuān)家小組制定的“非手術(shù)治療食管癌臨床分期”系統(tǒng)分期。該組患者中位年齡62.1歲（42～70歲）。三維適形技術(shù)常規(guī)分割放療，放療中位劑量56.5Gy(44Gy～60Gy)。同步行DC方案化療，多西他賽20mg/m2，順鉑25mg/m2于d1、d8、d15、

16、d26、d33、d40給藥。根據(jù)進(jìn)食困難緩解作為主觀療效評(píng)價(jià)，食管鋇餐造影作為客觀療效評(píng)價(jià)。并根據(jù)CTCAE3.0評(píng)估治療中毒副反應(yīng)。免疫組化方法檢測(cè)食管癌活檢組織中LC3A蛋白表達(dá)情況。分析DC方案聯(lián)合放療在ESCC中的近期療效及耐受性，并分析LC3A同ESCC放化療近期療效的關(guān)系。
　　 結(jié)果:
　　 1.(1) DC方案為基礎(chǔ)的同步放化療治療非手術(shù)ESCC患者，主觀有效率即進(jìn)食困難緩解率為88.7％（55/62）。

17、評(píng)分為0分，即無(wú)進(jìn)食吞咽困難患者由治療前3.1％（2/65）增加至50.0％(32/64)。
　　 (2)DC方案化療聯(lián)合放療治療ESCC患者，食管鋇餐造影評(píng)價(jià)完全緩解率(CR)48.4％(31/64)，部分緩解率(PR)為42.2％(27/64)，客觀有效率(ORR)為90.6％(58/64)。
　　 2.放射性食管炎及粒細(xì)胞減少是基于DC方案同步放化療的最常見(jiàn)副反應(yīng)。95.4％（62/65）患者出現(xiàn)放射性食管炎，輕度

18、（1/2度）發(fā)生率為73.9％(48/65)，3度放射性食管炎發(fā)生率為21.5％（14/65）。粒細(xì)胞減少發(fā)生率為61.6％(40/65)，但多數(shù)為輕度（1/2度）粒細(xì)胞減少癥，重度（3度以上）粒細(xì)胞減少癥發(fā)生率為3.1％(2/65)。
　　 3.LC3A低表達(dá)組ESCC患者CR率為58.1％（18/31），明顯高于LC3A高表達(dá)組38.2％（13/34），二者差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.001)。
　　 結(jié)論:基于DC方