探討APS-1患者中AIRE基因新突變位點對AIRE蛋白結(jié)構及功能的影響.pdf

1、目的：收集中國APS-1的病例，通過對病例資料進行分析整理，發(fā)現(xiàn)新的導致APS-1的AIRE基因突變位點，并驗證該突變位點是否對AIRE蛋白的結(jié)構及功能產(chǎn)生影響。
　　方法：(1)獲取臨床診斷為APS-1患者的病例，采集患者及其家系的血液樣本。(2)通過基因測序明確APS-1患者及其家系AIRE基因突變情況。(3)運用酵母雙雜交技術檢測突變AIRE蛋白的同源二聚化性質(zhì)。(4)運用流式檢測不同質(zhì)粒轉(zhuǎn)染293T細胞的轉(zhuǎn)染效率。(5)運

2、用RT-qPCR檢測外周組織限制性抗原（TRAs）的表達水平，以檢測突變AIRE蛋白的功能有無變化。
　　結(jié)果：(1)獲取臨床診斷為APS-1患者的病例1例,對病例信息進行分析整理。(2)明確APS-1患者及其家系AIRE基因突變情況：根據(jù)基因測序結(jié)果及患者家系的分析發(fā)現(xiàn)一個新的AIRE基因突變位點c.206A>C。(3)成功構建酵母雙雜交表達載體，酵母雙雜交實驗結(jié)果表明：突變的AIRE蛋白與正常的AIRE蛋白無相互作用，從而提示

3、新AIRE基因突變位點通過影響AIRE蛋白的二聚化特性影響AIRE蛋白的結(jié)構。(4)成功構建真核表達載體并轉(zhuǎn)染293T細胞，流式檢測結(jié)果表明：轉(zhuǎn)染含突變AIRE基因質(zhì)粒的293T細胞的轉(zhuǎn)染效率及GFP表達量明顯低于轉(zhuǎn)染含正常AIRE基因質(zhì)粒及空載質(zhì)粒的293T細胞。(5)運用RT-qPCR檢測外周組織限制性抗原的表達水平，結(jié)果表明：突變AIRE基因可以下調(diào)外周組織限制性抗原GAD65及TPH1的表達水平。
　　結(jié)論：新發(fā)現(xiàn)的AIR