福建省HIV-1耐藥性檢測及新耐藥相關(guān)突變位點(diǎn)的研究.pdf

1、目的
　　本研究旨評估自我構(gòu)建的人類免疫缺陷病毒1型(HIV-1)假病毒表型耐藥檢測系統(tǒng)并將其應(yīng)用于臨床耐藥檢測,進(jìn)而了解福建省HIV-1耐藥株的流行現(xiàn)況,并尋找新耐藥相關(guān)突變位點(diǎn)。
　　方法
　　1.對所收集的來自福建省2005~2011年定期隨訪的抗病毒治療失敗患者的臨床樣本及部分未治療的樣本進(jìn)行HIV-1基因型和表型耐藥檢測,分析福建省HIV-1耐藥株的流行現(xiàn)況,并將兩者檢測結(jié)果進(jìn)行比較。
　　2.采用卡方

2、檢驗(yàn)(或Fisher精確概率法)對所收集的福建省HIV-1主要流行毒株CRF01_AE亞型抗病毒治療與未治療序列在蛋白酶區(qū)(1~99位氨基酸)及反轉(zhuǎn)錄酶區(qū)(1~300位氨基酸)的各個(gè)其他突變位點(diǎn)逐一進(jìn)行比較,篩選在抗病毒治療失敗人群中發(fā)生頻率顯著高于未治療人群的可疑耐藥相關(guān)突變位點(diǎn),并利用前期自我構(gòu)建的表型耐藥檢測系統(tǒng),對所篩出的1個(gè)可疑耐藥突變位點(diǎn)即S68G進(jìn)行驗(yàn)證。
　　結(jié)果
　　1.將所構(gòu)建的29株假病毒表型耐藥檢測結(jié)

3、果與基因型耐藥解釋結(jié)果比較顯示,除了2株AZT檢測基因型解釋為耐藥而表型結(jié)果為敏感和1株3TC檢測基因型解釋為敏感而表型結(jié)果為耐藥,其余兩者的結(jié)果完全一致。
　　2.通過基因型和表型耐藥性檢測,發(fā)現(xiàn)福建省尚未治療的HIV-1感染者的耐藥率均較低,但對于病毒載量高于1000copies/ml的艾滋病治療失敗病人的總體耐藥率較高,特別是對核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NRTIs)和非核苷類反轉(zhuǎn)錄酶抑制劑(NNRTIs)類藥物。
　　3.

4、在福建省CRF01_AE亞型序列中共篩出10個(gè)在抗病毒治療失敗人群中的發(fā)生頻率顯著高于未治療人群的新可疑耐藥突變位點(diǎn)(P≤0.05),分別為蛋白酶區(qū)的K70R突變和反轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的I5V、K20R、I31L、K43Q、S68G、I142V、V111I、K173L、T200A突變。
　　4.通過構(gòu)建含S68G突變/回復(fù)突變假病毒及表型耐藥檢測方法對反轉(zhuǎn)錄酶區(qū)的S68G突變位點(diǎn)進(jìn)行驗(yàn)證,結(jié)果顯示該突變位點(diǎn)對降低AZT、D4T和3TC的藥物

5、敏感性作用均不大。
　　結(jié)論
　　1.HIV-1假病毒表型耐藥檢測系統(tǒng)具有很強(qiáng)的臨床耐藥檢測實(shí)用性,可用于指導(dǎo)臨床抗病毒治療。同時(shí)也為新的耐藥相關(guān)突變位點(diǎn)等基礎(chǔ)性研究提供重要的工具。
　　2.目前福建省尚未接受艾滋病抗病毒治療的HIV-1感染者的耐藥發(fā)生率較低,然而病毒學(xué)治療失敗病人的則較高,特別針對NRTIs和NNRTIs類藥物。
　　3.在福建省CRF01_AE亞型序列中共篩選出10個(gè)可疑的新耐藥突變位點(diǎn),其