維生素D依賴性佝僂病IA型兩家系的臨床及分子遺傳學研究.pdf

1、[目的]
　　分析2例維生素D依賴性佝僂病IA型（Vitamin D-dependent rickets type IA，VDDR-IA）患者的臨床特點、個體化治療及隨訪資料，以提高對本病的認識和診治水平，并通過2個VDDR-IA患者家系CYP27B1基因突變分析，為VDDR-IA的臨床診斷和治療提供依據(jù)，同時也可豐富中國病例基因突變類型數(shù)據(jù)庫。
　　[研究對象]
　　2例VDDR-IA患者及家系成員17人，另收集健康

2、志愿者101人作為對照，在獲得知情同意的情況下，由福建省福州兒童醫(yī)院內(nèi)分泌科專人采集外周血樣及收集相關(guān)病歷資料。所有受檢人員在此前均未接受過任何遺傳學相關(guān)檢測。
　　[研究方法]
　　1.臨床資料與方法
　　1.1.收集臨床相關(guān)資料：詳細記錄2例VDDR-IA患者及其家系成員的病史，進行體格檢查，并完成相關(guān)的實驗室檢查及影像學檢查，對病歷資料進行回顧性總結(jié)分析。
　　1.2.血清1,25-(OH)2D3水平測定：

3、抽取2例患者及其家系成員外周靜脈血，分離血清后應(yīng)用人1,25-(OH)2D3 ELISA檢測試劑盒進行血清1,25-(OH)2D3水平測定。
　　2. CYP27B1基因測序分析
　　2.1.外周靜脈血基因組DNA提?。撼槿?例患者及其家系成員和101例健康對照組的外周靜脈血，采用TIANGEN血液基因組DNA提取試劑盒提取基因組DNA。
　　2.2.PCR擴增CYP27B1基因片段：參考文獻資料，應(yīng)用Oligo6軟件

4、進行引物驗證及 PCR條件分析后對 CYP27B1基因9個外顯子及其內(nèi)含子相鄰區(qū)進行PCR擴增，通過預實驗確定PCR擴增最佳條件。
　　2.3.PCR產(chǎn)物測序和分析：所有PCR擴增后的產(chǎn)物均經(jīng)過1.5％瓊脂糖電泳檢測后，送測序公司切膠純化后直接測序，測序結(jié)果與Blastn中CYP27B1基因參考序列(NC_000012.11與NM_000785.3)進行對比分析，發(fā)現(xiàn)存在的堿基變異。
　　[結(jié)果]
　　1.臨床資料：2

5、例患者均有嚴重的佝僂病癥狀、體征及影像學表現(xiàn)，實驗室檢查提示低鈣血癥、低磷血癥、血清堿性磷酸酶及甲狀旁腺激素水平顯著升高、血清25-(OH)D3水平升高，1,25-(OH)2D3水平明顯降低。兩家系其他成員無相關(guān)臨床表現(xiàn)，實驗室檢查結(jié)果均正常。
　　2. CYP27B1基因測序結(jié)果：在2例VDDR-IA患者CYP27B1基因8號外顯子檢測到同一種純合子突變c.1319_1325dupCCCACCC，通過對其正常表型的父系及母系成員

6、的CYP27B1基因測序證實多人為雜合突變，101名正常對照個體CYP27B1基因相同位點測序未發(fā)現(xiàn)此突變。
　　3.患者的治療隨訪：予以骨化三醇和鈣劑個體化治療，2例患者癥狀明顯改善，實驗室檢查提示生化指標恢復正常，影像學檢查顯示骨骼損害明顯改善。
　　[結(jié)論]
　　本研究首次對來自中國同一小城市的2個完整大家系進行了基因突變分析。兩例患者均為CYP27B1基因8號外顯子c.1319_1325dupCCCACCC純合