SA-mIL15雙功能融合蛋白的制備及其生物學(xué)鑒定.pdf

1、白細(xì)胞介素15(interleukin-15)是1994年由Grabstein發(fā)現(xiàn)的一種多功能細(xì)胞因子,與IL-2(interleukin-2)共用IL-2R的β和γ亞單位,二者同屬四α螺旋細(xì)胞因子家族成員,具有許多相似的生物學(xué)功能。能促進(jìn)T細(xì)胞、B細(xì)胞的增殖,激活自然殺傷(NK)細(xì)胞,提高細(xì)胞毒性T細(xì)胞活性。許多研究發(fā)現(xiàn),IL-15具有明顯的抗腫瘤效應(yīng),其抗腫瘤指數(shù)甚至高于IL-2,因此,IL-15比IL-2在腫瘤治療中更具應(yīng)用前景。

2、
　　 利用腫瘤細(xì)胞表面易于生物素化和鏈親和素與生物素能高效而超強(qiáng)結(jié)合-這兩個(gè)特性,制備鏈親和素(SA)標(biāo)記的鼠白細(xì)胞介素-15融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,并研究其生物學(xué)功能。
　　 利用本室早期構(gòu)建pET24a-SA-L-mIL15和pET21a-mIL15-L-SA重組表達(dá)質(zhì)粒,本研究分別在大腸桿菌中表達(dá)融合蛋白SA-mIL15和mIL15-SA,對(duì)所表達(dá)的蛋白分別采用鎳金屬螯合(Ni-NTA)層析和

3、陰離子交換(DEAE)層析進(jìn)行純化,透析復(fù)性。MTT法檢測(cè)融合蛋白對(duì)ConA刺激的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)分析融合蛋白對(duì)生物素化的小鼠膀胱癌(MB49)細(xì)胞表面錨定修飾效率。
　　 SA-mIL15和mIL15-SA在大腸桿菌中實(shí)現(xiàn)了高效表達(dá),目的蛋白分別約占細(xì)菌總蛋白的20％、35％。制備的SA-mIL15和mIL15-SA融合蛋白純度均達(dá)到95％,并具有雙重活性,即:mIL15促進(jìn)ConA激活的小鼠脾淋巴

4、細(xì)胞的增殖活性和SA介導(dǎo)的高效結(jié)合至表面已生物素化的MB49細(xì)胞的功能(表面錨定修飾效率均大于95％)。其中,SA-mIL15雙功能融合蛋白促進(jìn)ConA激活的小鼠脾淋巴細(xì)胞增殖活性為lx106IU/mg,mIL15-SA活性為2x105IU/mg。
　　 SA/mIL15雙功能融合蛋白具有雙重活性,為mIL15表面錨定修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗的研制打下了基礎(chǔ),同時(shí)也為hIL15表面錨定修飾的腫瘤細(xì)胞疫苗的臨床試驗(yàn)提供理論基礎(chǔ)和實(shí)驗(yàn)依據(jù)