CYP2B6基因多態(tài)性對人肝代謝安非他酮的影響.pdf

1、CYP2B6是細胞色素P450家族中CYP2B亞家族的主要成員，其含量約占肝臟CYP總量的0.2％～6％，參與臨床約7％藥物的代謝。CYP2B6對藥物的代謝具有較大的個體差異。目前認為CYP2B6的基因多態(tài)性可能是引起個體差異的主要原因，但相關研究多數在人體體內和重組酶體系展開，前者不能單一反映代謝過程，后者與人體內環(huán)境相差較遠，而人肝是與人體最為接近的體外代謝平臺。
　　本研究擬以肝功能正常的人肝標本為研究對象，考察基因多態(tài)性對

2、CYP2B6代謝活性的影響，以期為臨床合理應用CYP2B6底物提供理論依據。
　　1、材料與方法
　　1.1人肝酶動力學參數的測定
　　采用差速離心法制備人肝微粒體，Bradford法測定肝微粒體蛋白含量。選用安非他酮作為CYP2B6的探針藥物，并以探針藥物的生物轉化程度(TR)作為反應速度。
　　收集肝功能正常的肝標本105例，年齡20～75歲，男性和女性分別為35例和70例，有吸煙史和飲酒史的分別為11例和1

3、0例，用藥史顯示近期均未用明顯影響CYP酶活性的藥物。探針藥物安非他酮的濃度范圍為78.125～5000μM，孵育體系中蛋白濃度均為0.5mg·ml-1，孵育時間均為60min，測定105例人肝的酶動力學參數Km、Vmax和CLint。.
　　1.2安非他酮代謝物羥基安非他酮濃度的測定
　　采用HPLC-UV測定孵育體系中安非他酮羥基安非他酮的濃度。色譜柱為DiamondC18柱，流動相為乙腈:50mM磷酸二氫鉀(pH3)=

4、21∶79，流速1ml·min-1，檢測μ長214nm。于反應體系中加入10μl高氯酸，渦旋離心，上清80μl進樣。所建立的測定方法在0.121～3.870μM范圍內呈現良好的線性關系(r＞0.999)，日內、日間變異均＜15％，相對回收率均在85％～115％之間，說明所建立的分析方法符合生物樣本的測定要求。
　　1.3CYP2B6的基因分型
　　采用DNA提取試劑盒提取肝組織中的DNA。PCR產物直接測序法對多態(tài)性位點CY

5、P2B6*4(785A＞G)、CYP2B6*6(516G＞T、785A＞G)及CYP2E1*9(516G＞T)進行基因分型。
　　1.4統(tǒng)計方法
　　采用GraphPadPrism5.0軟件計算酶動力學參數，SPSS17.0軟件對各項數據資料進行統(tǒng)計學分析。不同基因型酶動力學參數的比較采用非參數檢驗，檢驗水準α為0.05。
　　2、結果
　　2.1人肝CYP2B6酶動力學參數
　　以安非他酮為底物，人肝中C

6、YP2B6的酶動力學參數Km、Vmx及CLint（中位數，范圍）分別為(73.4，17.1～393.3)μM、(54.8，12.8～333.5)pmol·min-1·mg-1protein及(0.77，0.13～5.22)μl·min-1·mg-1protein，個體差異可達23～40倍。
　　2.2性別、年齡、吸煙及飲酒對人肝CYP2B6酶動力學參數的影響
　　統(tǒng)計分析結果顯示，受試者的性別、年齡、吸煙及飲酒對肝臟CYP2

7、B6酶動力學參數均無明顯影響。
　　2.3基因多態(tài)性對人肝CYP2B6酶動力學參數的影響
　　根據基因分型的綜合結果，105例病例可分為7種基因型，即CYP2B6*1/*1、*1/*4、*1/*6、*4/*6、*1/*9、*4/*4和*6/*6，其中基因型CYP2B6*1/*9、*4/*4和*6/*6攜帶者各1例。統(tǒng)計結果顯示，和野生型相比，CYP2B6*1/*6的攜帶者Km明顯增大，Vmax明顯降低，CLint明顯降低(P

8、＜0.05)。而基因型*1/*9者Vmax和CLint有明顯較大（均為*1/*1攜帶者中位數的5.9倍）;基因型*4/*4者Km明顯較大（為*1/*1攜帶者中位數的6.0倍），Vmax和CLint明顯較小，但均因病例數較少，無法進行統(tǒng)計學分析。
　　結論：
　　1.性別、年齡、吸煙及飲酒對人肝CYP2B6代謝活性無明顯影響。
　　2.CYP2B6*1/*6攜帶者人肝微粒體CYP2B6代謝活性明顯降低。
　　3.C