CYP2C9基因多態(tài)性對氟比洛芬體外代謝的影響.pdf

1、目的:
　　通過建立以氟比洛芬為底物的體外代謝體系，采用高效液相色譜-紫外檢測方法，研究健康正常人群細胞色素P4502C9基因多態(tài)性對氟比洛芬體外代謝的影響，考察CYP2C9野生型以及其他變異型的重組酶對氟比洛芬體外代謝的影響差異，為臨床合理使用氟比洛芬提供了實驗依據(jù)和理論指導(dǎo)。
　　方法:
　　1、氟比洛芬及其代謝物4-羥基氟比洛芬的測定采用ZORBAX SB-C18色譜柱分離;流動相為乙腈-水-0.1％TFA梯度洗

2、脫;流速為1mL/min，柱溫40℃;檢測波長280nm。
　　2、建立氟比洛芬重組酶的孵育體系，300μ1體系中包含5～160μmol/L的氟比洛芬和各變異型的重組酶，37℃水浴中孵育12分鐘后，終止反應(yīng)。樣品經(jīng)處理后，提取氟比洛芬及其代謝產(chǎn)物，經(jīng)高效液相檢測，得出代謝產(chǎn)物(4-羥基氟比洛芬)的生成量。通過GraphPad5.0作圖，求出CYP2C9野生型以及其他變異型重組酶的酶動力學(xué)參數(shù)(Km和Vmax)，通過計算獲得其清除率

3、。得出羥基氟比洛芬的相對清除率后，將其與氯沙坦代謝物的相對清除率進行比較，得出相同之處和不同之處。
　　結(jié)果:
　　1、實驗表明，氟比洛芬在2.5～320μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.999)，4-羥基氟比洛芬在0.1～50μmol/L濃度范圍內(nèi)線性關(guān)系良好(R2=0.993)，定量下限氟比洛芬為2.5μmol/L，4-羥基氟比洛芬為0.1μmol/L。氟比洛芬和4-羥基氟比洛芬的日內(nèi)、日間精密度的RSD均小

4、于15％;提取回收率均大于65％，穩(wěn)定性的RSD均小于10％。
　　2、相對于CYP2C9野生型(CYP2C9*1)重組酶，各變異型重組酶的代謝活性均發(fā)生了改變，Km和Vmax都有不同程度的變化。除CYP2C9*53和CYP2C9*56，其他各變異型的清除率明顯低于野生型的清除率。其中，以下這些變異型活性介于CYP2C9*2與野生型之間:CYP2C9*34，*37，*38，*44，*46，*47，*48，*50，*51和*54;

5、CYP2C9*11,*14,*27,*29,*36,*40,*41,*49和*55介于CYP2C9*2和CYP2C9*3之間，其余變異型的活性更弱。另外，*33和*43由于活性太弱，生成的代謝物濃度太低，因而無法檢測其代謝產(chǎn)物。與氯沙坦代謝物比較，個別型差異很大，比如*36型。
　　結(jié)論:
　　1、本實驗建立的檢測體外代謝的氟比洛芬及其代謝物濃度的高效液相色譜法，操作簡便，分離完全，結(jié)果可靠，可用于藥物代謝動力學(xué)分析。