CYP2D6基因多態(tài)性對抗抑郁藥阿米替林體外代謝的影響.pdf

1、目的:研究在中國漢族人群中發(fā)現(xiàn)的CYP2D6各個基因型對抗抑郁藥阿米替林體外代謝的影響。
　　方法:
　　1、建立HPLC紫外檢測方法，用以檢測阿米替林和去甲替林。
　　2、以阿米替林(AT)為底物，建立CYP2D6重組酶體外孵育體系。用昆蟲細胞制備的野生型CYP2D6*1和24個CYP2D6變異型分別與底物(10-1000μmol/L)在37℃水浴搖床中孵育30 min后，-80℃冰箱中終止反應，樣品經(jīng)萃取法加以處理

2、后，通過HPLC紫外檢測所生成的代謝產(chǎn)物去甲替林(NT)濃度，分別計算并比較CYP2D6野生型與24種CYP2D6變異型重組酶的酶動力學參數(shù)(Km，Vmax及Vmx/Km)，評價24種CYP2D6等位基因變異型對阿米替林體外代謝的影響。
　　結果:
　　1、去甲替林濃度的線性關系在1～1000μg/mL范圍內良好，相關系數(shù)大于0.998;低、中、高(5、50、500μg/mL)3個濃度日內以及日間的精密度RSD范圍為1.24

3、％～5.33％，均在可接受范圍;回收率范圍為94.3％～99.1％，樣品在8℃保存24h以及在-80℃冰箱冰凍保存一周下均有良好的穩(wěn)定性。
　　2、以清除率(Intrinsic Clearance)作為評價CYP2D6各變異型對阿米替林體外代謝活性的主要參數(shù)。與野生型相比，這些重組酶絕大多數(shù)表現(xiàn)出了Km，Vmax，Vmax/Km值的變化:其中22個變異型表現(xiàn)出Km的顯著增高和17個變異型表現(xiàn)出Vmax的顯著降低; CYP2D6*9