電針對(duì)窒息腦癱幼鼠海馬、紋狀體和運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)GAP-43表達(dá)影響的研究.pdf

1、目的：觀察電針對(duì)窒息性腦性癱瘓（Cerebral palsy，CP）新生大鼠海馬、紋狀體和運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)內(nèi)神經(jīng)生長相關(guān)蛋白（Growth associated protein，GAP-43）表達(dá)的影響，探討電針治療腦癱的意義及機(jī)制。 方法：1、7日齡新生Sprague-Dawley（SD）大鼠72只，隨機(jī)分為假手術(shù)組、CP造模組、CP+電針組3組，每組24只。各組大鼠再隨機(jī)分為術(shù)后3、7、14、21d4個(gè)時(shí)間組，每組6只；2、3組大鼠

2、在吸入乙醚淺麻醉的狀態(tài)下，取頸前正中切口，電針組、造模組分離左側(cè)頸總動(dòng)脈并結(jié)扎，置于氧氣濃度為8％、氮?dú)鉂舛葹?2％的密閉氮氧倉中缺氧2h，以Longa評(píng)分2～3分的實(shí)驗(yàn)鼠視為成功模型，隨機(jī)納入電針組和造模組；假手術(shù)組僅分離左側(cè)頸總動(dòng)脈即縫合切口，3組大鼠于術(shù)后返回母鼠籠中喂養(yǎng)；3、電針組于造模后24h開始治療，選取百會(huì)、大椎、脊中、后會(huì)等穴位針刺，針接66805-Ⅱ電針儀，每日2次，各時(shí)間組在最后1日第2次治療后2h處死取材：4、取前

3、囟前1～3mm（觀察運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)和紋狀體區(qū)）、前囟后3～5mm（觀察海馬區(qū)）各厚2mm的兩塊冠狀腦組織切片，片厚4μm。每塊大鼠腦組織各制作一張免疫組化染色（SABC法）及一張HE染色的切片：5、采用Leica IM50圖像采集系統(tǒng)對(duì)各組免疫組化切片進(jìn)行圖像采集，在不同大鼠左側(cè)腦組織切片的海馬（CA1-3）區(qū)、紋狀體區(qū)和運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)6個(gè)完整而不重疊的高倍鏡視野（×400）采圖，應(yīng)用Image-Pro Plus圖像分析軟件對(duì)每個(gè)視野下陽性反應(yīng)

4、物的平均光密度和陽性面積率進(jìn)行測定，觀察GAP-43在大鼠腦組織切片的左側(cè)海馬（CA1-3）區(qū)、紋狀體區(qū)和運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)區(qū)表達(dá)的變化。 結(jié)果：1、光鏡下觀察HE染色切片可見，假手術(shù)組各時(shí)間點(diǎn)腦組織形態(tài)基本正常。造模組和電針組大鼠各時(shí)間點(diǎn)左側(cè)腦組織在不同區(qū)域出現(xiàn)典型的凋亡細(xì)胞形態(tài)變化，細(xì)胞染色質(zhì)濃縮、聚集于核邊緣成塊狀、環(huán)狀或新月狀；細(xì)胞體積縮小、核固縮深染、細(xì)胞膜出泡、凋亡小體形成。未凋亡神經(jīng)元細(xì)胞胞體腫脹，變大，胞漿染色變淺。7、1

5、4、21d大鼠腦組織凋亡細(xì)胞有減少的趨勢，神經(jīng)元變性逐漸消失；2、各組GAP-43免疫組化染色陽性物質(zhì)呈棕黃色顆粒，聚集于神經(jīng)元胞體及軸突。假手術(shù)組免疫陽性顆粒染色淺，數(shù)量少；而造模組和電針組海馬、紋狀體及運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)神經(jīng)細(xì)胞胞漿可見大量深棕色GAP-43免疫陽性顆粒，其中運(yùn)動(dòng)皮質(zhì)各層神經(jīng)細(xì)胞均有陽性反應(yīng)；3、與假手術(shù)組比較，造模組和電針組在不同的腦區(qū)各時(shí)間點(diǎn)GAP-43表達(dá)的平均光密度與陽性面積率都顯著增高（P<0．01）；電針組在大多數(shù)