二苯乙烯苷對腦缺血再灌注大鼠大腦皮質(zhì)NGF、PKAc及GAP-43蛋白表達(dá)的影響.pdf

1、背景與目的：腦缺血損傷后細(xì)胞的存活、增殖受多種信號途徑的調(diào)節(jié)。研究顯示，外源性神經(jīng)生長因子（NGF）能夠上調(diào)cAMP的表達(dá)，激活PKA通路，使軸突生長相關(guān)蛋白43（GAP-43）的表達(dá)增加，促進(jìn)軸突再生，起到神經(jīng)保護(hù)作用。近年來研究發(fā)現(xiàn)中藥何首烏（polygonum multiflorum thunb）及其活性成分二苯乙烯苷（tetrahydroxystilbene glucoside，簡稱TSG）對腦缺血損傷具有保護(hù)作用，但其作用機制

2、與量效關(guān)系仍不十分明確。另外，有研究顯示二苯乙烯苷能夠提高內(nèi)源性神經(jīng)生長因子的表達(dá)，從而提高小鼠的學(xué)習(xí)記憶能力，起到腦保護(hù)作用。本研究將在大鼠腦缺血－再灌注損傷模型上，以二苯乙烯苷（兩組劑量）為干預(yù)手段，通過動態(tài)觀察大鼠局灶性腦缺血再灌注后缺血半暗帶NGF、PKAc與GAP-43蛋白的表達(dá)及小、大兩組TSG劑量對三者的影響，結(jié)合病理、神經(jīng)功能和細(xì)胞凋亡方面，探討該藥在腦缺血保護(hù)作用中的可能機制及量效關(guān)系，以期為腦缺血的防治以及新藥的開發(fā)

3、提供實驗基礎(chǔ)。 方法：200～300g健康雄性SD大鼠，隨機分為4組：對照組（n＝24），模型組（n＝24），小劑量TSG組（n=24），大劑量TSG組（n＝24）。小劑量為60mg/kg/d、大劑量為120mg/kg/d兩種劑量灌胃，給藥體積5ml/kg/d，模型組以等量的生理鹽水灌胃，第七天灌胃后1h行Longa線栓法制備大腦中動脈栓塞模型（MCAO）。按Longa的5級標(biāo)準(zhǔn)評分法評價神經(jīng)功能缺損。再灌注6h、24 h、48

4、 h、7d共4個時間點處死大鼠。分別采用HE染色觀察缺血周邊區(qū)病理組織學(xué)變化；原位末端脫氧核苷酸轉(zhuǎn)移酶標(biāo)記法（TUNEL）檢測神經(jīng)細(xì)胞凋亡；免疫組化法檢測NGF、PKAc及GAP-43蛋白表達(dá)變化。 結(jié)果： 1、兩種劑量TSG組神經(jīng)功能缺損程度除6h時間點外其余各時間點均低于模型組。 2、模型組與兩種劑量TSG組再灌注24 h的HE染色均顯示出典型的壞死灶和神經(jīng)元丟失。 3、對照組檢測到少量凋亡細(xì)胞；模型

5、組與TSG組再灌注6h后凋亡細(xì)胞開始增多，24 h達(dá)高峰，48 h明顯下降，7d僅有少量表達(dá)。與模型組對比，除7d外，其余各時間點兩種劑量TSG組凋亡細(xì)胞數(shù)減少；兩種劑量TSG組間無明顯差異。 4、對照組各時間點檢測到少量NGF、PKAc及GAP-43蛋白的表達(dá)。模型組與TSG組NGF、PKAc、GAP-43蛋白的表達(dá)變化基本一致，其中前兩者再灌注6h后出現(xiàn)陽性表達(dá)，24 h達(dá)到高峰，48 h表達(dá)下降，7天少量表達(dá)；而GAP-4