可轉(zhuǎn)形穴位注射藥對(duì)腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)VEGF、bFGF的影響.pdf

1、目的:
　　本實(shí)驗(yàn)采用可生物降解的高分子材料，將川芎嗪制備成合適的可轉(zhuǎn)形新型穴位注射藥，使得該藥具有在室溫下為液體狀，在體內(nèi)形成半固體凝膠狀的特性。同時(shí)以川芎嗪作為模型藥物，選取了腦缺血再灌注大鼠，在其大椎穴和雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴埋可轉(zhuǎn)型新型穴位注射藥，并與在相同穴位埋川芎嗪藥物羊腸線進(jìn)行比較。采用免疫組化的方法觀察治療大鼠腦皮質(zhì)區(qū)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)表達(dá)的影響。
　　方法:
　　本研究采

2、用正交設(shè)計(jì)法，將殼聚糖混合物、無水磷酸氫二鉀和川芎嗪按一定比例混合制備成可轉(zhuǎn)形穴位注射藥，研究該藥埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位后的吸收速度和安全性及對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦皮質(zhì)區(qū)血管內(nèi)皮生長(zhǎng)因子(VEGF)和堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF)表達(dá)的影響。
　　(1)對(duì)其吸收速度的實(shí)驗(yàn)研究，選用健康SD大鼠，隨機(jī)分為模型組、假手術(shù)組、川芎嗪藥物羊腸線組和可轉(zhuǎn)形穴位注射藥組，將浸泡過川芎嗪注射液的羊腸線2mm和同等劑量的可轉(zhuǎn)形穴位注射藥(2ml∶4mg)0.1m

3、l植入大椎穴和雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴。于3天、5天、7天后進(jìn)行穴位局部解剖，觀察川芎嗪藥物羊腸線和可轉(zhuǎn)形穴位注射藥在大鼠穴位內(nèi)吸收消失的情況。
　　(2)對(duì)其安全性的實(shí)驗(yàn)研究，先選用健康豚鼠，將一定量的可轉(zhuǎn)形穴位注射藥涂擦于豚鼠皮膚上，進(jìn)行皮膚過敏實(shí)驗(yàn);再選用健康SD大鼠，將可轉(zhuǎn)形穴位注射藥0.5ml注入大鼠肌肉豐厚處，觀察15天內(nèi)大鼠皮膚有無紅斑、水腫等過敏反應(yīng)及哮喘、休克等全身過敏現(xiàn)象。
　　(3)對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)血管

4、內(nèi)皮生長(zhǎng)因子和堿性成纖維生長(zhǎng)因子影響的實(shí)驗(yàn)研究，選用健康SD大鼠40只，體重200±20g，隨機(jī)分為4組:模型組10只，假手術(shù)組10只，川芎嗪藥物羊腸線組10只，可轉(zhuǎn)形穴位注射藥組10只。采用改良線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型(MCAO)，選取大椎穴和雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴進(jìn)行穴位埋藥處理。所有動(dòng)物在觀察7天后采用心臟灌注技術(shù)斷頭取腦，固定于4％多聚甲醛溶液中6-8h，進(jìn)行石蠟包埋的腦塊為視交叉后1-4mm，用免疫組化法測(cè)定大鼠腦皮質(zhì)區(qū)VEGF和b

5、FGF的表達(dá)，并采用HPIAS-1000計(jì)算機(jī)高清晰彩色圖像分析儀對(duì)切片進(jìn)行圖像分析，對(duì)所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　結(jié)果:
　　1.過敏實(shí)驗(yàn)顯示:在豚鼠皮膚過敏實(shí)驗(yàn)和埋藥大鼠體內(nèi)過敏實(shí)驗(yàn)中，可轉(zhuǎn)形穴位注射藥未引起實(shí)驗(yàn)大鼠皮膚紅斑、水腫等癥狀，也未引起哮喘、休克等全身過敏現(xiàn)象。
　　2.藥物吸收速度實(shí)驗(yàn)顯示:于3天、5天后進(jìn)行穴位解剖，兩種藥均存在，可轉(zhuǎn)形穴位注射藥呈現(xiàn)出比較穩(wěn)定的半固體凝膠狀，川芎嗪藥物羊腸線與動(dòng)物組

6、織呈現(xiàn)鑲嵌融合狀態(tài)，于7天后穴位解剖發(fā)現(xiàn)可轉(zhuǎn)形穴位注射藥仍然存在，但凝膠狀態(tài)較之前不穩(wěn)定，以散在的絮狀和塊狀形式存在，而另一種藥線在穴位局部已經(jīng)找不到。
　　3.免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:模型組大鼠腦皮質(zhì)區(qū)VEGF和bEGF陽性細(xì)胞明顯增多，可轉(zhuǎn)形穴位注射藥組、川芎嗪藥物羊腸線組和假手術(shù)組同時(shí)與模型組比較，對(duì)VEGF和bFGF表達(dá)的影響有顯著性差異(P＜0.05);其中，可轉(zhuǎn)形穴位注射藥線組VEGF和bFGF蛋白表達(dá)的效果明顯優(yōu)于