穴位植入川芎嗪藥線對(duì)腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)MMP-9、TIMP-1的影響.pdf

1、目的:
　　 在目前針灸治療缺血性腦血管病的基礎(chǔ)上,應(yīng)用穴位埋線療法,結(jié)合現(xiàn)代藥理學(xué)研究,制備川芎嗪藥線,于大鼠大椎、雙側(cè)內(nèi)關(guān)穴埋線,觀察其對(duì)腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)基質(zhì)金屬蛋白酶-9(MMP-9)及其抑制劑-1(TIMP-1)的調(diào)節(jié)作用。
　　 方法:
　　 隨著線體的改變,埋線方法及埋線后對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物的影響都在一定程度上存在差異,因此,本研究參照湯玉峰等的實(shí)驗(yàn)研究,采用正交設(shè)計(jì)法,將殼聚糖混合物、無(wú)水磷酸氫二鉀和

2、川芎嗪按一定比例混合制備成川芎嗪藥線(因其在低于37度環(huán)境中為溶膠狀,在體內(nèi)或者高于37度可成為半固體凝膠狀,所以稱其為可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線)并進(jìn)一步研究該藥線埋入實(shí)驗(yàn)動(dòng)物穴位后的安全性、吸收速度及對(duì)實(shí)驗(yàn)動(dòng)物腦皮質(zhì)區(qū)MMP-9、TIMP-1的影響。
　　 (1)對(duì)其安全性的實(shí)驗(yàn)研究,先選用健康豚鼠,將一定量的可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線涂擦于豚鼠皮膚上,進(jìn)行皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn);再選用健康SD大鼠,將可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線0.5ml注入大鼠肌肉豐厚處,觀察1

3、5天內(nèi)大鼠皮膚有無(wú)紅斑、水腫等過(guò)敏反應(yīng)及哮喘、休克等全身過(guò)敏現(xiàn)象。
　　 (2)對(duì)其吸收速度的實(shí)驗(yàn)研究,選用健康SD大鼠,隨機(jī)分為可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線組,川芎嗪藥物羊腸線組,川芎嗪膠原藥線組,將相同長(zhǎng)度的川芎嗪膠原藥線2mm和浸泡過(guò)川芎嗪注射液的羊腸線2mm,藥物同等劑量的可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線(2m1:40mg)0.1ml植入大椎、內(nèi)關(guān)穴。于3天、5天、7天后穴位局部解剖,肉眼觀察可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線、川芎嗪藥物羊腸線、川芎嗪膠原藥線在大鼠

4、穴位內(nèi)吸收消失的情況。
　　 (3)對(duì)局灶性腦缺血再灌注大鼠皮質(zhì)區(qū)基質(zhì)金屬蛋白酶-9和基質(zhì)金屬蛋白酶組織抑制劑-1的影響的實(shí)驗(yàn)研究,選用健康SD大鼠40只,體重200±20g,隨機(jī)分為4組:模型組10只,可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線組10只,川芎嗪藥物羊腸線組10只,川芎嗪膠原藥線組10只。采用改良線栓法制備大鼠腦缺血再灌注模型(MCAO),選取穴位大椎、內(nèi)關(guān)進(jìn)行穴位埋藥線處理。所有動(dòng)物在最后觀察日24h后采用心臟灌注技術(shù)斷頭取腦,固定于4

5、％多聚甲醛溶液中6-8h,進(jìn)行石蠟包埋的腦塊為視交叉后1-4mm,用免疫組化法測(cè)定大鼠腦皮質(zhì)區(qū)MMP-9、TIMP-1的表達(dá),并采用HPIAS-1000計(jì)算機(jī)高清晰彩色圖像分析儀對(duì)切片進(jìn)行圖像分析,所得數(shù)據(jù)進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)處理。
　　 結(jié)果:
　　 1.過(guò)敏實(shí)驗(yàn)顯示:在豚鼠皮膚過(guò)敏實(shí)驗(yàn)和藥線植入大鼠體內(nèi)過(guò)敏實(shí)驗(yàn)中,可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線未引起實(shí)驗(yàn)大鼠皮膚紅斑、水腫等癥狀,也未引起哮喘、休克等全身過(guò)敏現(xiàn)象。
　　 2.藥線吸收

6、速度實(shí)驗(yàn)顯示:3天、5天后穴位解剖,三種藥線均存在,可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線呈現(xiàn)出比較穩(wěn)定的半固體凝膠狀,川芎嗪藥物羊腸線和川芎嗪膠原藥線與動(dòng)物組織呈現(xiàn)鑲嵌融合狀態(tài),7天后穴位解剖發(fā)現(xiàn)可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線仍然存在,但凝膠狀態(tài)較前不穩(wěn)定,以散在的絮狀和塊狀形式存在,后兩種藥線在穴位局部已經(jīng)找不到。
　　 3.免疫組化檢測(cè)實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示:模型組大鼠腦皮質(zhì)區(qū)MMP-9陽(yáng)性細(xì)胞明顯增多,有少量TIMP-1表達(dá),可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線組、川芎嗪藥物羊腸線組、

7、川芎嗪膠原藥線組同時(shí)與模型組比較,對(duì)MMP-9和TIMP-1表達(dá)的影響有顯著性差異(P＜0.05);其中,可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線組降低MMP-9、升高TIMP-1蛋白表達(dá)的效果明顯優(yōu)于后兩組(P＜0.05);后兩組同時(shí)比較,無(wú)顯著性差異(P＞0.05)。
　　 結(jié)論:
　　 1.可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線可作為一種安全、被緩慢吸收的新型穴位埋植藥線應(yīng)用于臨床。
　　 2.可轉(zhuǎn)形川芎嗪藥線可上調(diào)TIMP-1,下調(diào)MMP-9,從而減