IL-6在大鼠慢性高眼壓模型中對(duì)GAP-43表達(dá)影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、第一部分建立大鼠慢性高眼壓模型
　　目的：
　　通過燒灼鞏膜上靜脈構(gòu)建大鼠慢性高眼壓模型，觀察大鼠模型眼不同時(shí)期的眼壓、視網(wǎng)膜形態(tài)學(xué)及視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells，RGCs)數(shù)的變化。
　　方法：
　　取35只健康雌性SD大鼠并采用隨機(jī)數(shù)字表法隨機(jī)分為空白對(duì)照組(5只大鼠，5只眼)、假手術(shù)組(5只大鼠，5只眼)和手術(shù)組(25只大鼠，25只眼)；手術(shù)組又分為5小組（術(shù)后1天組、術(shù)后

2、3天組、術(shù)后7天組、術(shù)后14天組和術(shù)后28天組）每組5只，采用大鼠鞏膜表層的房水引流靜脈燒灼法對(duì)手術(shù)組大鼠進(jìn)行高眼壓造模，假手術(shù)組以分開結(jié)膜不燒灼靜脈做假性對(duì)照，空白對(duì)照組不做任何處理；各組均以右眼為處理眼。
　　空白對(duì)照組、假手術(shù)組和手術(shù)組（術(shù)后28天組）分別于術(shù)前、術(shù)后30min、第1天、第3天、第5天、第7天、第14天、第28天，采用TonoLab眼壓計(jì)測(cè)量右眼眼壓，并對(duì)測(cè)量值進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析；
　　手術(shù)組各小組分別在術(shù)

3、后第1天、第3天、第7天、第14天、第28天摘除右眼眼球，左眼做對(duì)照眼，石蠟切片，進(jìn)行HE染色，觀察視網(wǎng)膜形態(tài)變化，并統(tǒng)計(jì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞數(shù)進(jìn)行分析。
　　結(jié)果：
　　眼壓測(cè)量：35只大鼠（35眼）術(shù)前基線眼壓是（8.4±1.75）mmHg，手術(shù)組（術(shù)后28天組），高眼壓造模燒灼鞏膜上靜脈30min后術(shù)眼眼壓為（15.4±1.52）mmHg，較術(shù)前基線眼壓明顯升高（p<0.01）；術(shù)后第1天、第3天、第5天、第7天、第14天

4、、第28天測(cè)得眼壓均高于空白對(duì)照組和假手術(shù)組（p<0.01）。
　　手術(shù)組各小組（術(shù)后1天組、術(shù)后3天組、術(shù)后7天組、術(shù)后14天組和術(shù)后28天組）術(shù)眼眼眼壓均高于對(duì)照眼眼壓（P＜0.01）。
　　RGCs計(jì)數(shù)：空白對(duì)照組RGCs細(xì)胞數(shù)為30.93±3.42（個(gè)/高倍視野），光學(xué)顯微鏡下大鼠視網(wǎng)膜組織結(jié)構(gòu)層次清晰，由外向內(nèi)可觀察到：感光層(PL)、外界膜(ELM)、外核層(ONL)、外叢狀層(OPL)、內(nèi)核層(INL)、內(nèi)叢狀

5、層(IPL)、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞層(GCL)、神經(jīng)纖維層(NFL)。手術(shù)組對(duì)照眼與空白對(duì)照組RGCs細(xì)胞數(shù)相差無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。手術(shù)組術(shù)后第1天，視網(wǎng)膜組織水腫，以NFL和IPL最明顯，RGCs細(xì)胞數(shù)目較空白對(duì)照組減少4.85％，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p<0.05）。術(shù)后第3天、第7天、第14天，RGCs數(shù)依次減少8.63%、15.39%、16.52%及25.06%，晚期視網(wǎng)膜水腫逐漸消腫、萎縮、變薄。假手術(shù)組和空白對(duì)照組相比，RGCs數(shù)

6、差異無明顯統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（p＞0.05）。
　　結(jié)論：
　　成功建立大鼠慢性高眼壓動(dòng)物模型，其視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞減少可能與持續(xù)高眼壓相關(guān)。
　　第二部分IL-6在大鼠慢性高眼壓模型中對(duì)GAP-43的表達(dá)影響
　　目的：
　　觀察白細(xì)胞介素-6(Interleukin-6，IL-6)在大鼠慢性高眼壓模型中，對(duì)生長(zhǎng)相關(guān)蛋白-43(Growth asociated protein-43，GAP-43)在大鼠視網(wǎng)膜中的表

7、達(dá)影響，探討其對(duì)視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞(retinal ganglion cells，RGCs)的相關(guān)作用，為臨床RGCs的保護(hù)性治療提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：
　　取80只健康雌性SD大鼠隨機(jī)分為空白對(duì)照組、慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對(duì)照組4組，每組20只（20只眼）。慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對(duì)照組分別進(jìn)行高眼壓造模，空白對(duì)照組不做處理；
　　造模后一周眼壓穩(wěn)定，IL-6治療組進(jìn)行玻璃體腔注射IL-630

8、0ng，治療對(duì)照組玻璃體腔注射等量生理鹽水；
　　根據(jù)用藥前后觀察時(shí)間將4組各分為4個(gè)小組(每小組5只大鼠，5只眼)，各組分別于用藥前，用藥后第1天、第7天、第14天摘除眼球，制作蠟塊切片，分別進(jìn)行HE染色及免疫組織化學(xué)染色。觀察視網(wǎng)膜形態(tài)變化，量化RGCs及分析GAP-43表達(dá)的積分光密度，進(jìn)行統(tǒng)計(jì)分析。
　　結(jié)果：
　　用藥前與用藥后第1天、第7天、第14天，慢性高眼壓組、IL-6治療組和治療對(duì)照組之間眼壓值差異無

9、統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05）；均比空白對(duì)照組眼壓高（p＜0.01）。
　　用藥前及用藥后第1天，IL-6治療組、慢性高眼壓組和治療對(duì)照組之間RGCs計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)意義（P>0.05），但均較空白對(duì)照組RGCs計(jì)數(shù)減少（p＜0.01）。用藥后第7天、第14天，慢性高眼壓組比IL-6治療組RGCs數(shù)目減少明顯，差異顯著（P<0.05）；慢性高眼壓組和治療對(duì)照組之間RGCs計(jì)數(shù)差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P>0.05），3組均較空白對(duì)照組RGCs計(jì)

10、數(shù)減少（p＜0.01）。
　　IL-6治療組在觀察時(shí)間內(nèi)RGCs計(jì)數(shù)維持穩(wěn)定（P>0.05），均高于慢性高眼壓組和治療對(duì)照組RGCs計(jì)數(shù)（P<0.01），但仍較空白對(duì)照組RGCs計(jì)數(shù)少（P<0.05）。治療對(duì)照組和慢性高眼壓組在觀察時(shí)間內(nèi) RGCs計(jì)數(shù)均呈逐漸減少的趨勢(shì)（P<0.05）。
　　GAP-43表達(dá)于各組神經(jīng)纖維層、RGCs、以及內(nèi)叢狀層。用藥前及用藥后第1天，IL-6治療組、慢性高眼壓組與治療對(duì)照組之間GAP-4