貓睫狀體及外傷后aPVR慢性低眼壓模型中Cx43表達(dá)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的研究正常貓睫狀體細(xì)胞間直接通訊縫隙連接(GJ)蛋白Cx43的表達(dá)及分布；進(jìn)而探索外傷后前部增殖性玻璃體視網(wǎng)膜病變(aPVR)慢性低眼壓模型中，Cx43蛋白在傷后不同時(shí)間采樣點(diǎn)表達(dá)位置和表達(dá)量的變化，并將其與相應(yīng)的眼壓發(fā)展變化趨勢(shì)作比較，探討Cx43構(gòu)成的GJ在睫狀體房水分泌中的重要意義。 方法1.采用文獻(xiàn)報(bào)道已建立的外傷后aPVR慢性低眼壓模型，用貓作為實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，HE染色作病理觀察。Schiotz眼壓計(jì)測(cè)量正常與傷后各采樣時(shí)

2、間點(diǎn)貓眼IOP，并采用雙砝碼對(duì)讀校正，分析△IOP(IOP傷后-IOP傷前)變化趨勢(shì)。 2.采用熒光免疫組織化學(xué)方法，通過(guò)熒光顯微鏡以及電鏡觀察Cx43在貓正常睫狀體的表達(dá)分布，以及傷后其各采樣時(shí)間點(diǎn)的分布變化。 3.利用免疫印跡(Westernblotting)技術(shù)檢測(cè)正常及傷后各采樣時(shí)間點(diǎn)貓睫狀體中Cx43蛋白表達(dá)量的差別和變化趨勢(shì)。 結(jié)果1.IOP的變化：傷后6小時(shí)、12小時(shí)IOP均略升高，1天實(shí)驗(yàn)組傷后眼

3、壓比傷前升高約1.875mmHg(△IOP＞0)；此后眼壓逐漸下降，其中1-3天以及1-4周時(shí)間段IOP下降幅度較大，4周時(shí)△IOP已達(dá)10.55mmHg(△IOP＜0)。 2.貓睫狀體上皮PE細(xì)胞呈立方狀、NPE細(xì)胞高柱狀，與人相應(yīng)細(xì)胞形態(tài)有所不同。 3.正常貓睫狀體Cx43的表達(dá)：本實(shí)驗(yàn)證明Cx43在貓睫狀體上亦有表達(dá)，且只分布在睫狀體雙層上皮外側(cè)PE細(xì)胞與內(nèi)側(cè)NPE細(xì)胞頂對(duì)頂?shù)慕唤缑嫔?，外?cè)的基質(zhì)成份和睫狀肌中皆無(wú)

4、表達(dá)。 4.外傷后aPVR慢性低眼壓模型Cx43表達(dá)位置的變化：傷后6小時(shí)、12小時(shí)Cx43表達(dá)位置基本沒(méi)有變化。但傷后1天，除了PE-NPE雙層上皮之間的分布，Cx43在色素上皮層(PE)細(xì)胞之間亦出現(xiàn)高表達(dá)，3天時(shí)同樣；傷后1周，在此變化基礎(chǔ)上無(wú)色素上皮層(NPE)細(xì)胞之間也出現(xiàn)Cx43蛋白分布；而2周、4周時(shí)Cx43在PE和NPE各自層內(nèi)細(xì)胞間的表達(dá)消失，還原為陰性。 5.外傷后aPVR慢性低眼壓模型Cx43蛋白表

5、達(dá)量變化趨勢(shì)：從正常組依序到實(shí)驗(yàn)組各采樣時(shí)間點(diǎn)，Cx43蛋白表達(dá)量的變化呈雙波峰曲線。實(shí)驗(yàn)組組睫狀體Cx43在傷后1天增高1倍，于1周時(shí)顯著增高約3倍，隨后又逐漸減少，2周已減少至與正常對(duì)照值相當(dāng)?shù)乃剑敝?周降為最低。 6.傷后△IOP與Cx43表達(dá)量除在傷后1周有背離外，二者趨勢(shì)大體一致。 結(jié)論1.由于貓眼球球壁硬度較低，Schiotz眼壓計(jì)直接測(cè)量結(jié)果即使是相對(duì)差值與采用雙砝碼對(duì)讀校正后的結(jié)果仍有較大偏差。因此采

6、用雙砝碼對(duì)讀校正眼壓在動(dòng)物實(shí)驗(yàn)中十分重要。 2.Cx43表達(dá)分布在正常貓眼睫狀體PE和NPE頂對(duì)頂?shù)慕唤缣?，連接異型細(xì)胞成為功能合胞體，這種在關(guān)鍵位置的表達(dá)決定了其通訊作用的關(guān)鍵性，貓可以作為眼科學(xué)睫狀體胞間通訊在房水分泌機(jī)理和調(diào)控研究的有效實(shí)驗(yàn)動(dòng)物。 3.傷后Cx43分布自PE層到NPE的增加表達(dá)表明：睫狀體上皮房水分泌的始動(dòng)步驟可能發(fā)生在PE細(xì)胞層，NPE細(xì)胞的活躍繼發(fā)于PE之后，PE細(xì)胞始發(fā)和主導(dǎo)了房水分泌行為。