中華大蟾蜍生長相關(guān)蛋白-43(GAP-43)基因的克隆與原核表達(dá).pdf

1、脊椎動物中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)神經(jīng)發(fā)育和受損后再生能力在魚類、兩棲類和哺乳類動物中存在不同,而造成再生能力不同的因為主要是神經(jīng)再生微環(huán)境中的分子在不同類動物中的差異。GAP-43作為神經(jīng)發(fā)育和受損后再生過程中的一個標(biāo)志性分子,在魚類、兩棲類和哺乳類動物進(jìn)化中一級結(jié)構(gòu)上發(fā)生了變化,兩棲動物中華大蟾蜍與不同類動物的差別對脊椎動物中樞神經(jīng)再生的研究具有十分重要的意義。
　　 本文以中華大蟾蜍作為研究對象,根據(jù)GenBank上公布的非洲

2、爪蟾的GAP-43基因序列設(shè)計引物,以中華大蟾蜍腦組織總RNA為模板進(jìn)行RT-PCR,克隆出654bp大小的基因片段,Blast分析表明該核酸序列為中華人蟾蜍的GAP-43編碼序列,序列已被提交到GenBank,其登錄號為FJ794607。利用軟件BioXM2.6將該序列翻譯成氨基酸序列,與斑馬魚、小鼠、非洲爪蟾等13種、三類動物間進(jìn)行了GAP-43的氨基酸序列同源性分析,結(jié)果表明:3、4位半胱氨酸、“IQ”基序和PKC磷酸化位點這三個

3、功能單位在不同類動物中保守,而60位至c端的序列的同源性很低,中華大蟾蜍在該序列中具有更多的絲氨酸(Ser)。
　　 利用軟件對中華大蟾蜍GAP-43氨基酸序列進(jìn)行了親水性、信號肽、跨膜區(qū)域、亞細(xì)胞定位、二級結(jié)構(gòu)的預(yù)測。結(jié)果表明:中華人蟾蜍GAP-43是酸性、親水性氨基酸,在其序列N端不存在信號肽；GAP-43不是一種跨膜蛋白,其氨基酸序列中不存在跨膜區(qū)域,較大可能性地定位于胞質(zhì)膜側(cè)；GAP-43含有18個二級結(jié)構(gòu)域,其中卷曲結(jié)