醋酸棉酚對豬原代培養(yǎng)黃體細胞凋亡影響的研究.pdf

1、我國是一個產棉大國，棉籽餅粕資源豐富，營養(yǎng)價值高，且價格低廉，日益成為飼料中植物蛋白的重要來源。但棉酚是棉籽餅粕中的主要有毒成分，棉酚的雄性抗生育作用早已被證實，而棉酚對雌性的繁殖毒性作用研究較少，觀點不一。為探討棉酚對母畜的繁殖毒性作用，合理開發(fā)利用棉籽餅粕作為畜禽配合飼料，進行了本試驗。 試驗采用長大雜母豬原代培養(yǎng)黃體細胞為模型，通過MTT法、DNALadder檢測和TUNEL法，初步探討0、0.4、2、10、50μg/mL

2、醋酸棉酚對豬原代培養(yǎng)黃體細胞的凋亡影響以及毒性作用。用機械分離和0.2﹪膠原酶Ⅱ消化相結合的方法分離黃體細胞，0.4﹪臺盼蘭拒染試驗顯示其活率在90﹪以上。豬原代培養(yǎng)黃體細胞生長良好，預培養(yǎng)24h進行試驗，滿足試驗要求。MTT檢測結果表明：5﹪乙醇溶劑對照組與0μg/mL組比較，無差異性(P＞0.05)，說明5﹪乙醇對豬原代培養(yǎng)黃體細胞的影響可以忽略。處理24h，0.4μg/mL濃度組與溶劑對照組比較，差異顯著(P＜0.05)，其它各濃

3、度組差異極顯著(P＜0.01)；處理48h，各濃度組與溶劑對照組比較，差異均極顯著。兩時間段同水平間比較，10μg/mL和50μg/mL組差異極顯著；48h兩濃度組黃體細胞抑制率分別達60﹪和70﹪。瓊脂糖凝膠電泳各組均未檢測到DNALadder。TUNEL檢測結果表明：各劑量組均有黃體細胞凋亡，凋亡率5﹪～23﹪，隨著醋酸棉酚濃度的增加細胞凋亡率也增加。24h和48h各劑量組與溶劑對照組相比，差異均極顯著。兩時間段同水平間比較，0.4

4、μg/mL和2μg/mL組無差異性；10μg/mL和50μg/mL組差異極顯著。豬原代培養(yǎng)黃體細胞試驗模型的成功應用，為體外研究黃體的相關試驗提供了方法借鑒。醋酸棉酚在低、高劑量下均能抑制豬原代培養(yǎng)黃體細胞的增殖和誘導其凋亡。低劑量下主要通過誘導黃體細胞凋亡，從而抑制細胞增殖；高劑量下除誘導細胞凋亡外，主要對細胞直接造成損傷，產生細胞毒性。這種作用呈劑量相關性；在一定劑量下，有時間依賴關系。鑒于棉酚在低劑量時能誘導黃體細胞凋亡，影響母畜