血紅素加氧酶-1對(duì)原代培養(yǎng)大鼠肺泡Ⅱ型細(xì)胞凋亡的影響.pdf

1、目的:探討血紅素加氧酶-1(hemeoxygenase-1,HO-1)對(duì)過(guò)氧化氫(hygrogenperoxide,H2O2)氧化損傷的肺泡Ⅱ型上皮細(xì)胞(alveolarepithelialtypeⅡcell,AEC-Ⅱ)凋亡的影響,研究其對(duì)細(xì)胞線粒體的作用。
　　 方法:26只健康雄性SD大鼠,均予腹腔麻醉、氣管插管、開(kāi)胸取肺,分離提純AEC-Ⅱ,將細(xì)胞以1×106個(gè)/ml接種于培養(yǎng)板,原代培養(yǎng)24h,將細(xì)胞隨機(jī)分為四組:正常

2、組,H2O2組,HO-1組,HO-1抑制組(鋅原卟啉Ⅸ)。采用H2O2(0.5mmol/L)損傷AEC-Ⅱ,復(fù)制活性氧(Reactiveoxygenspecies,ROS)攻擊損傷體內(nèi)AEC-Ⅱ細(xì)胞的情況,建立急性肺損傷(acutelunginjury,ALI)細(xì)胞模型;用HO-1(0.2μmol/L)或鋅原卟啉Ⅸ(20μmol/L)進(jìn)行細(xì)胞外直接干預(yù)。電鏡鑒定AEC-Ⅱ,熒光顯微鏡、流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡率,流式細(xì)胞儀檢測(cè)線粒體跨膜電

3、位去極化的比例,蛋白印跡法(Westernblotting)檢測(cè)線粒體相關(guān)蛋白Bcl-2、p53表達(dá)的變化。
　　 結(jié)果:電鏡下鑒定可見(jiàn)AEC-Ⅱ的特征性結(jié)構(gòu):細(xì)胞表面很多長(zhǎng)短不一粗細(xì)不等的微絨毛,胞漿內(nèi)數(shù)量不等、大小不一、不同成熟階段的嗜鋨性板層小體(見(jiàn)圖1)。熒光顯微鏡檢測(cè):與正常組比較,H2O2組、HO-1抑制組均可見(jiàn)大量呈綠色、紅色熒光的凋亡細(xì)胞;HO-1組所見(jiàn)熒光細(xì)胞明顯減少(見(jiàn)圖3)。流式細(xì)胞儀檢測(cè):與正常組比較,H

4、2O2組、HO-1抑制組細(xì)胞凋亡率增加(P＜0.05),且隨H2O2作用時(shí)間的延長(zhǎng)細(xì)胞凋亡率增加;線粒體跨膜電位去極化的比例降低(P＜0.05)。與H2O2組比較,HO-1組AEC-Ⅱ細(xì)胞凋亡率明顯降低(P＜0.05);線粒體跨膜電位去極化的比例升高(P＜0.05)。Westernblotting法:與正常組比較,HO-1組Bcl-2表達(dá)明顯增強(qiáng)、p53表達(dá)減弱,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05);與HO-1組比較,H2O2組、HO-1抑