抗血小板藥物對(duì)高血壓大鼠微循環(huán)及血管重構(gòu)的作用和炎癥內(nèi)皮微粒對(duì)內(nèi)皮通透性的作用研究.pdf

1、目的:第一部分:探討抗血小板藥物氯吡格雷對(duì)自發(fā)性高血壓大鼠(SHR)微循環(huán)及血管重構(gòu)的作用。第二部分:探討炎癥因子C反應(yīng)蛋白刺激人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的內(nèi)皮微粒對(duì)體外培養(yǎng)單層內(nèi)皮細(xì)胞通透性的作用。
　　方法:第一部分:SPF級(jí)雄性13周齡SHR隨機(jī)分為溶劑對(duì)照組、氯吡格雷組、奧美拉唑組及兩藥混合組，每組5只，分別灌胃1 mL0.5％羧甲基纖維素鈉(CMC-Na)、氯吡格雷溶液(10mg/kg)、奧美拉唑溶液（20mg/kg）及兩藥混

2、合溶液，每日一次。連續(xù)四周后，首先用高功率激光多普勒血流探測(cè)儀(LDF)檢測(cè)大鼠腦皮質(zhì)、耳廓及趾血流量、血細(xì)胞聚集度和血流速度，用血流成像儀(LDPI)觀察腦血流分布狀態(tài);取溶劑對(duì)照組和氯吡格雷組大鼠的腦和主動(dòng)脈固定，利用HE染色觀察主動(dòng)脈管壁厚度、管壁面積、管腔面積及管壁平滑肌、利用HE染色觀察腦微血管數(shù)及利用免疫組化方法檢測(cè)腦皮質(zhì)血管內(nèi)皮細(xì)胞CD31表達(dá)量等血管重構(gòu)和微血管稀疏情況。采用SPSS17.0統(tǒng)計(jì)學(xué)軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析和比較

3、。
　　第二部分:體外培養(yǎng)人臍帶靜脈內(nèi)皮細(xì)胞株(HUVEC)，以倒置顯微鏡觀察細(xì)胞生長(zhǎng)過程并繪制細(xì)胞生長(zhǎng)曲線。HUVEC經(jīng)不同濃度C反應(yīng)蛋白(0、25、50、75μg/mL)作用12h，收集細(xì)胞培養(yǎng)液以制備內(nèi)皮微粒。利用流式細(xì)胞儀檢測(cè)CD62E+內(nèi)皮微粒的百分率;利用Transwell系統(tǒng)檢測(cè)內(nèi)皮微粒對(duì)HUVEC通透性的影響;利用免疫熒光染色觀察不同濃度內(nèi)皮微粒對(duì)HUVEC肌動(dòng)蛋白F-actin的表達(dá)影響。
　　結(jié)果:第一部

4、分:氯吡格雷組高血壓大鼠的腦皮質(zhì)、耳廓和趾血流量顯著高于溶劑對(duì)照組（P值分別＜0.05、0.01和0.05）;氯吡格雷組高血壓大鼠的耳廓和趾血流速度顯著高于溶劑對(duì)照組（P值分別＜0.001和0.05）;氯吡格雷組高血壓大鼠腦血流分布曲線與溶劑對(duì)照組相比整體右移，其腦高血流量（800-1500 PU）面積百分比顯著高于溶劑對(duì)照組(P＜0.01);本實(shí)驗(yàn)結(jié)果中，奧美拉唑在對(duì)微循環(huán)作用中并未顯示對(duì)氯吡格雷改善微循環(huán)的減效作用。氯吡格雷組大鼠主

5、動(dòng)脈管壁厚度及面積明顯低于溶劑對(duì)照組（P＜0.05），血管平滑肌增殖較溶劑對(duì)照組有所改善，排列相對(duì)連續(xù)工整，管腔面積與管壁面積比值明顯高于溶劑對(duì)照組（P＜0.05），氯吡格雷組大鼠腦皮質(zhì)內(nèi)微血管數(shù)明顯高于溶劑對(duì)照組(P＜0.05)，血管CD31表達(dá)量明顯高于溶劑對(duì)照組(P＜0.05)。
　　第二部分:細(xì)胞接種8h后完全貼壁，6d后細(xì)胞融合可達(dá)80-90％，其中2-4d為細(xì)胞對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期，數(shù)目明顯增多，體積增大，胞漿豐富，其他時(shí)間則變

6、化不明顯;與對(duì)照組相比，梯度濃度C反應(yīng)蛋白(25、50、75μg/mL)可以刺激HUVEC產(chǎn)生更高的CD62E+內(nèi)皮微粒，其中50和75μg/mL兩個(gè)濃度有顯著差異（P值分別＜0.01和0.05）;與對(duì)照組相比，不同濃度內(nèi)皮微粒（2500、5000、10000個(gè)/mL）使HUVEC通透性在15、30、60、90 min時(shí)刻顯著增高（P值均分別＜0.01、0.05和0.001）;與對(duì)照組相比，隨著刺激HUVEC的內(nèi)皮微粒濃度升高，F(xiàn)-ac

7、tin由細(xì)胞周圍和細(xì)胞連接處向細(xì)胞內(nèi)遷移，致密外周束逐漸減少，應(yīng)力纖維和中央短纖維逐漸增粗增多。
　　結(jié)論:第一部分:氯吡格雷能夠明顯改善高血壓大鼠體表和腦微循環(huán)，其機(jī)制可能與改善血管重構(gòu)及有效增加微血管數(shù)量相關(guān)，有利于高血壓預(yù)后和降低心腦血管并發(fā)癥的發(fā)生。
　　第二部分:在炎癥因子C反應(yīng)蛋白刺激下內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生了特定表型的內(nèi)皮微粒，以這種內(nèi)皮微粒再作用于正常內(nèi)皮細(xì)胞，可導(dǎo)致正常內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞通透性發(fā)生顯著變化，這種改變會(huì)對(duì)進(jìn)