糖尿病腦梗死后Aβ產(chǎn)生與自噬的關(guān)系及NBP對其干預(yù)的研究.pdf

1、本研究分為三部分：
　　 第一部分、糖尿病腦梗死后腦損傷產(chǎn)生的機(jī)制及NBP對其干預(yù)的研究
　　 Alzheimer病(AD)是一種常見的慢性進(jìn)行性神經(jīng)功能衰退性疾病，是癡呆最常見的類型，患病人數(shù)占癡呆患者總數(shù)的50-60％。糖尿病亦是當(dāng)今社會中發(fā)展迅速的流行病之一。流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，糖尿病與學(xué)習(xí)記憶和思維能力的下降等認(rèn)知功能的障礙有關(guān)。腦中風(fēng)是目前人類主要的致殘病因，流行病學(xué)研究發(fā)現(xiàn)，腦中風(fēng)是AD發(fā)病的重要原因之一。而糖

2、尿病所導(dǎo)致的血液高凝狀態(tài)及腦血管病變又是導(dǎo)致缺血性中風(fēng)發(fā)生的重要原因之一。探尋糖尿病患者中風(fēng)后癡呆防治的途徑是目前科學(xué)研究的熱點(diǎn)問題。自噬對新陳代謝起著舉足輕重的作用，營養(yǎng)缺乏、腦外傷、老年癡呆及其它相關(guān)的神經(jīng)退行性疾病可導(dǎo)致自噬水平的增高。丁基苯肽(NBP)最早是一種從芹菜籽中提取的化合物，研究發(fā)現(xiàn)其可以通過多條途徑對腦中風(fēng)后缺血性損傷發(fā)揮腦保護(hù)作用。
　　 在本研究中，為探索糖尿病腦梗死后腦損傷產(chǎn)生的機(jī)制及NBP對其干預(yù)的作

3、用，我們構(gòu)建C57BL/6小鼠糖尿病腦梗塞模型(DM+VO)，模擬了臨床上常見的糖尿病伴發(fā)腦梗塞患者的病理狀態(tài)。在此基礎(chǔ)上給與NBP進(jìn)行藥物干預(yù)。通過Y迷宮檢測實(shí)驗(yàn)動物認(rèn)知狀態(tài)．并利用免疫組織化學(xué)、免疫印跡和電鏡技術(shù)檢測腦損傷程度、癡呆相關(guān)蛋白表達(dá)及自噬狀態(tài)。所得結(jié)果總結(jié)如下：NBP改善糖尿病腦缺血實(shí)驗(yàn)小鼠在Y迷宮測試中的認(rèn)知功能障礙；NBP改善糖尿病腦缺血實(shí)驗(yàn)小鼠腦內(nèi)神經(jīng)元丟失和膠質(zhì)細(xì)胞活化；NBP降低糖尿病腦缺血實(shí)驗(yàn)小鼠腦內(nèi)Aβ表達(dá)

4、；糖尿病加劇中風(fēng)誘導(dǎo)的自噬活性增高，而NBP降低糖尿病腦缺血實(shí)驗(yàn)小鼠腦內(nèi)自噬體的表達(dá)；實(shí)驗(yàn)動物腦內(nèi)表達(dá)增高的Aβ+信號與LC3+信號具有明顯的共定位。
　　 結(jié)論：糖尿病加劇腦梗死誘導(dǎo)的Aβ表達(dá)可能與腦內(nèi)自噬活性上調(diào)有關(guān)，而NBP可能通過調(diào)節(jié)腦內(nèi)自噬而減少Aβ的生成；調(diào)節(jié)自噬可能成為防治中風(fēng)后癡呆的有效治療方法。
　　 第二部分、NBP可能通過上調(diào)糖尿病大鼠海馬內(nèi)VEGF的表達(dá)抑制神經(jīng)細(xì)胞凋亡
　　 目的：探索在

5、實(shí)驗(yàn)性糖尿病大鼠腦內(nèi)，NBP對于糖尿病所致的慢性腦損傷的腦保護(hù)作用。
　　 方法：通過腹腔注射給與SD大鼠STZ (65 mg/kg)建立實(shí)驗(yàn)性糖尿病模型，灌胃給予NBP(80 mg/kg/day)，6周后通過免疫組化檢測其海馬內(nèi)GFAP、CDllb、凋亡因子-活化型Caspase-3和抗凋亡蛋白VEGF。
　　 結(jié)果：與正常對照動物相比，實(shí)驗(yàn)性糖尿病動物海馬內(nèi)GFAP、CDllb、VEGF陽性細(xì)胞(685.1±35.5

6、cells/mm2 in diabetic rats vs. 320.6±21.9 cells/mm2 in Control rats,P<0.05, n=5)和VEGF+-Caspase-3+陽性細(xì)胞(393.4±24.2 cells/mm2 vs. 135.8±12.0cells/mm2 in Control rats，P< 0.05，n=5)表達(dá)增高；然而，給予NBP的糖尿病實(shí)驗(yàn)動物( DM-NBP)海馬內(nèi)GFAP、CDllb和C

7、aspase-3陽性細(xì)胞(240.0±15.1cells/mm2，n=5)表達(dá)下降，而VEGF陽性細(xì)胞(837.2±20.1 cells/mm2，n=5)表達(dá)增高。
　　 結(jié)論：糖尿病增加實(shí)驗(yàn)動物海馬內(nèi)膠質(zhì)細(xì)胞活化、細(xì)胞凋亡和代償性的神經(jīng)營養(yǎng)因子VEGF表達(dá)，而NBP可能通過上調(diào)糖尿病實(shí)驗(yàn)動物腦內(nèi)VEGF表達(dá)抑制Caspase-3介導(dǎo)的神經(jīng)細(xì)胞凋亡。
　　 第三部分、糖尿病加劇大鼠腦缺血損傷及皮層淀粉樣蛋白的生成

8、　　 目的：探討糖尿病對缺血誘導(dǎo)的腦損傷和癡呆相關(guān)蛋白表達(dá)的影響。
　　 方法：通過高脂飲食結(jié)合小劑量鏈脲佐菌素(STZ)誘導(dǎo)糖尿病模型；短暫性大腦中動脈栓塞(MCAO)誘導(dǎo)腦中風(fēng)。再灌1周后，采用免疫組織化學(xué)染色的方法觀察糖尿病對腦缺血后梗塞灶體積及皮層神經(jīng)細(xì)胞內(nèi)淀粉樣蛋白(Aβ)及其生成關(guān)鍵酶β-分泌酶(BACE)表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果：腦缺血后，與正常對照組相比，糖尿病組實(shí)驗(yàn)動物梗塞灶體積增大，且皮層存在大量神