PAMAM樹(shù)形大分子介導(dǎo)miR-21抑制劑聯(lián)合化療抑制腦膠質(zhì)瘤研究.pdf

1、惡性腦膠質(zhì)瘤是中樞神經(jīng)系統(tǒng)最常見(jiàn)的惡性腫瘤之一，化療藥物耐受是化療低效的重要原因。基因治療協(xié)同化療實(shí)現(xiàn)化療增敏是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。本項(xiàng)目組將基因治療與先進(jìn)材料技術(shù)相結(jié)合，以PAMAM樹(shù)形大分子為載體，實(shí)現(xiàn)靶向miR-21反義寡核苷酸(as-miR-21)與5-氟尿嘧啶(5-FU)及紫杉醇(taxol)的體外腫瘤細(xì)胞內(nèi)共傳遞，共同抑制人腦膠質(zhì)瘤細(xì)胞的生長(zhǎng)。
　　 凝膠電泳法研究PAMAM與as-miR-21配比對(duì)基因負(fù)載的影響，證明

2、當(dāng)N/P大于16∶1時(shí)，as-miR-21與PAMAM完全結(jié)合，且復(fù)合物呈荷正電性。透射電鏡研究了PAMAM/as-miR-21復(fù)合物的形貌，粒徑在60～80nm，適合于體內(nèi)外基因轉(zhuǎn)染的要求。以U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞為模型，研究PAMAM載體對(duì)as-miR-21的轉(zhuǎn)染效果，并與oligofectamin進(jìn)行了對(duì)比。動(dòng)態(tài)熒光顯微鏡觀察發(fā)現(xiàn)PAMAM組的轉(zhuǎn)染效果顯著優(yōu)于oligofectamin組；流式細(xì)胞儀驗(yàn)證了上述結(jié)果，PAMAM組轉(zhuǎn)染后4

3、小時(shí)達(dá)到最高轉(zhuǎn)染效率，并且從轉(zhuǎn)染3-7h都可以保持較高的轉(zhuǎn)染效率。
　　 以U251膠質(zhì)瘤細(xì)胞為模型，研究PAMAM介導(dǎo)5-FU聯(lián)合as-miR-21的抑瘤作用。透析法合成5-FU/PAMAM，其藥物包封率為(66.21±4.11)％，平均載藥量為(31.77±0.73)％。藥物釋放行為研究表明，PAMAM具有很好的緩釋作用。凝膠電泳表明載藥后對(duì)基因配比沒(méi)有明顯影響；MTT顯示聯(lián)合治療組細(xì)胞增殖率顯著降低，流式細(xì)胞儀檢測(cè)細(xì)胞凋亡

4、比例顯著升高，transwell法檢測(cè)細(xì)胞遷移能力顯著下降。證明PAMAM介導(dǎo)5-FU聯(lián)合as-miR-21對(duì)膠質(zhì)瘤的生長(zhǎng)具有明顯的抑制作用，是治療膠質(zhì)瘤細(xì)胞的新策略。
　　 以U251和LN229膠質(zhì)瘤細(xì)胞為模型，研究PAMAM介導(dǎo)miR-21抑制劑聯(lián)合紫杉醇的抑瘤作用。MTT法表明聯(lián)合治療組細(xì)胞IC50顯著降低，紫杉醇在U251的IC50值從400nmo/L降低到60nmo/L；在LN229中的IC50值從820nmo/L降

5、低到160nmo/L。MTT結(jié)果表明聯(lián)合治療組細(xì)胞增殖率顯著降低，流式細(xì)胞儀表明細(xì)胞凋亡比例顯著升高，細(xì)胞周期的G0/G1期和S期均被阻滯；transwell法檢測(cè)聯(lián)合治療組細(xì)胞體外侵襲能力顯著下降。Western blot結(jié)果表明EGFR、p-AKT、STAT3、p-STAT3、BcL-2、Cyclin D1、MMP-2、MMP-9蛋白的表達(dá)水平均有明顯的下調(diào)，而PTEN和Caspase-3的表達(dá)則明顯上調(diào)。證明PAMAM介導(dǎo)miR-