一種新的人NK細胞系的建立、特征及抗腫瘤效應(yīng)研究.pdf

1、中國科學(xué)技術(shù)大學(xué)博士學(xué)位論文一種新的人NK細胞系的建立、特征及抗腫瘤效應(yīng)研究姓名：程民申請學(xué)位級別：博士專業(yè)：細胞生物學(xué)指導(dǎo)教師：田志剛20100401摘要II細胞系體外培養(yǎng)352天，凍存后復(fù)蘇繼續(xù)培養(yǎng)180天以上，細胞形態(tài)及性狀穩(wěn)定。NKG細胞為大顆粒淋巴細胞，體外培養(yǎng)倍增時間為23天。2.NKG細胞的表型及功能分子的表達細胞的表型及功能分子的表達NKG細胞的表型鑒定為CD56CD16CD27CD3αβTCRγδTCRCD4CD8CD

2、19CD161CD45。NKG細胞表面表達高水平CD2、CD58、CD11a、CD54、CD11b及CD11c等粘附分子；高表達共刺激分子CD48。NKG細胞表面表達抑制性受體CD94NKG2A、CD158b和CD85j，同時亦表達高水平NKp30、NKp44、NKp46、NKG2D和NKG2C等活化性受體。另外，與細胞殺傷功能相關(guān)的TRAIL、FasL、granzymeB、perfin和IFNγ等均在ΝΚG細胞中表達。上述結(jié)果表明，Ν

3、ΚG細胞具有活化性NK細胞的特征。3.NKG細胞的抗腫瘤細胞毒活性及其分子機制細胞的抗腫瘤細胞毒活性及其分子機制NKG細胞對多種腫瘤細胞系均有較強的殺傷活性，尤其是對SGC7901和Ho8910細胞的殺傷活性80%（ET=201）。與NK92、NKL及YT細胞相比，NKG細胞對Ho8910細胞的殺傷活性明顯增強。體外抗體阻斷及中和實驗表明NKG細胞的細胞毒活性主要依賴于NKG2D和NKp30識別機制。當γ輻照劑量達800cGY時，輻照后

4、的NKG細胞失去增殖能力，但在48小時內(nèi)維持其對腫瘤細胞的殺傷活性。體外實驗進一步證明800cGY輻照后的NKG細胞對原代分離的人卵巢癌細胞具有較強的殺傷活性(75%~45%ET=201)。4.人卵巢癌小鼠模型中人卵巢癌小鼠模型中NKG細胞的免疫治療作用細胞的免疫治療作用利用Ho8910細胞腹腔注射的方式接種裸鼠，成功建立人卵巢癌裸鼠腹水瘤模型。當將800cGY輻照后的NKG細胞與Ho8910細胞按5：1混合后接種裸鼠，結(jié)果顯示小鼠成瘤

5、時間由28~44天延遲至90~135天，成瘤率由100%明顯降低至50%。NKG細胞治療組小鼠腹圍明顯減少，盡管在觀察時間內(nèi)50%小鼠死亡，但其平均生存時間由61.5天明顯延長至210.2天。以上結(jié)果表明NKG細胞在小鼠體內(nèi)對人卵巢癌細胞具有明顯的殺傷功能。當在Ho8910細胞接種后第21天，給予800cGY輻照后的NKG細胞進行治療，結(jié)果表明治療組小鼠成瘤時間由28~38天延后至56~66天，小鼠成瘤率由100%降低至62.5%，成瘤