腎臟Telocyte細(xì)胞系的建立及功能研究.pdf

1、目的：分離培養(yǎng)鑒定人及大鼠腎臟Telocyte細(xì)胞(TC)，并研究其分布、形態(tài)、超微結(jié)構(gòu)、免疫表型；建立人及大鼠腎臟TC細(xì)胞系；探索TC對(duì)于腎小管上皮細(xì)胞(Tubular Epithelial Cell，TEC)增殖和凋亡的影響；驗(yàn)證間充質(zhì)干細(xì)胞(Mesenchymal Stem Cell，MSC)通過旁分泌方式促進(jìn)腎小管上皮細(xì)胞增殖并抑制其凋亡的作用；揭示TC作為MSC支持細(xì)胞的作用機(jī)制；研究TC與MSC細(xì)胞對(duì)話在腎臟損傷修復(fù)中的作用

2、。
　　 方法：利用原代細(xì)胞培養(yǎng)、免疫組織化學(xué)、透射電鏡等方法發(fā)現(xiàn)人及大鼠腎臟TC并了解其形態(tài)、分布及超微結(jié)構(gòu)；利用細(xì)胞免疫熒光、活細(xì)胞染色及線粒體標(biāo)記等方法鑒定腎臟TC；通過差時(shí)貼壁、顯微切割、傳代等細(xì)胞培養(yǎng)技術(shù)純化腎臟TC并建立TC細(xì)胞系；利用Cell-IQ技術(shù)探索TC生長(zhǎng)規(guī)律及作為干細(xì)胞支持細(xì)胞的功能相關(guān)性形態(tài)學(xué)特征；利用成骨及成脂誘導(dǎo)液對(duì)腎臟TC進(jìn)行體外誘導(dǎo)分化；培養(yǎng)大鼠MSC細(xì)胞，并利用流式細(xì)胞儀、誘導(dǎo)分化等方法進(jìn)行M

3、SC鑒定；利用MillicellTM系統(tǒng)建立共培養(yǎng)體系，實(shí)現(xiàn)大鼠腎臟TC與TEC的共培養(yǎng)、TC與MSC的共培養(yǎng)、MSC與TEC的共培養(yǎng)，探索TC作為MSC支持細(xì)胞的作用機(jī)制；建立大鼠腎臟缺血再灌注動(dòng)物模型，通過陰莖背靜脈給予TC共培養(yǎng)預(yù)處理的MSC，利用腎臟損傷病理評(píng)分及TUNEL評(píng)分研究TC與MSC細(xì)胞對(duì)話在腎臟損傷修復(fù)中的作用。
　　 結(jié)果：人及大鼠腎臟皮質(zhì)中存在TC，TC常位于腎小管及小血管周圍間質(zhì)，緊密包繞腎小管或間質(zhì)小

4、血管；腎臟TC具有特殊的形態(tài)特征，細(xì)長(zhǎng)串珠樣的突起Tp，Podom及Podomer結(jié)構(gòu)明顯，胞內(nèi)線粒體發(fā)達(dá)，富含分泌性囊泡及致密顆粒，表達(dá)CD117、CD34及Vimentin，不表達(dá)CD31、D2-40及Tryptase；TEM及IHC未發(fā)現(xiàn)腎臟髓質(zhì)中存在TC，但髓質(zhì)標(biāo)本原代培養(yǎng)可觀察到TC，其占總細(xì)胞總數(shù)的比例較皮質(zhì)??；腎臟TC穩(wěn)定傳代至40代，表型穩(wěn)定；腎臟TC的體外誘導(dǎo)分化未顯示其成脂及成骨潛能；MSC與TEC共培養(yǎng)可顯著促進(jìn)T

5、EC的增殖并抑制其凋亡，且MSC對(duì)TEC的促增殖抑凋亡作用通過旁分泌方式實(shí)現(xiàn)；TC與TEC共培養(yǎng)不能直接促進(jìn)TEC的增殖或抑制其凋亡；經(jīng)與TC共培養(yǎng)預(yù)處理的MSC，其對(duì)TEC促增殖抑凋亡的作用較單純MSC的效果顯著增強(qiáng)，提示TC可以通過旁分泌方式增強(qiáng)MSC的腎臟保護(hù)作用；經(jīng)陰莖背靜脈給予TC預(yù)處理的MSC可顯著減輕腎臟缺血再灌注損傷，改善腎功能。
　　 結(jié)論：人及大鼠腎臟皮質(zhì)中存在TC，其形態(tài)特征、免疫表型均符合經(jīng)典TC標(biāo)準(zhǔn)；成