間接接觸共培養(yǎng)下骨髓間充質干細胞分化為心肌樣細胞及相關調控基因的時序表達.pdf

1、目的:應用新生大鼠心肌細胞(cardiomyocytes，CMs)與骨髓間充質干細胞(mesenchymal stem colls,MSCs)體外間接接觸共培養(yǎng)的方法模擬心肌內環(huán)境，研究模擬環(huán)境下MSCs向CMs的分化情況及相關調控基因的時序表達，篩選MSCs定向分化為心肌細胞的重要調控基因。 　方法:MSCs及CMs按1:5的比例進行體外間接接觸共培養(yǎng)，連續(xù)觀察兩周，相差顯微鏡下觀察MSCs形態(tài)變化，免疫熒光方法鑒定心肌特征性

2、肌動蛋白α(α-actin)和肌鈣蛋白T(cTnT)的表達，應用半定量RT-PCR分析TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4、MEF-2C、TEF-1等相關調控基因在分化過程中的時序表達。 　結果:共培養(yǎng)前MSCs呈成纖維細胞樣，共培養(yǎng)后細胞形態(tài)發(fā)生變化，細胞體積增大，梭形形態(tài)逐漸變短變粗，近似棒狀或橢圓形，細胞之間形成連接，排列方向趨于一致。MSCs共培養(yǎng)前及共培養(yǎng)1天、3天未見cTnT及α-actin陽性表達，共培養(yǎng)5天、

3、7天、14天時cTnT陽性細胞百分率分別為7.14％、22.435、28.77％，α-actin陽性細胞百分率分別為9.205、22.88％、28.89％。TGF-β、Nkx-2.5、GATA-4和MEF-2C基因在共培養(yǎng)后一天表達開始增強，共培養(yǎng)后七天達高峰，以后雖有所下降但仍維持在較高水平；TEF-1基因在誘導過程中表達無明顯變化。 　結論:間接接觸共培養(yǎng)條件下MSCs可分化為心肌樣細胞；且在此過程中，TGF-β、Nkx-2