不同種屬動(dòng)物對(duì)大豆凝集素敏感性的比較研究.pdf

1、本試驗(yàn)以六種動(dòng)物(雞、鵝、狗、兔、豬、山羊，各4個(gè)重復(fù))為研究對(duì)象，通過細(xì)胞凝集和吸附測(cè)定兩種方法，研究了純化大豆凝集素(SBA)對(duì)不同種動(dòng)物的影響。凝集反應(yīng)試驗(yàn)采用吸光法測(cè)定了SBA與動(dòng)物未經(jīng)修飾的紅細(xì)胞、胰蛋白酶修飾的紅細(xì)胞和脾臟淋巴細(xì)胞的凝集活性；吸附試驗(yàn)采用ELLSA法測(cè)定了SBA與小腸粘膜和完整小腸組織的結(jié)合能力。 試驗(yàn)中所用的純化SBA用交聯(lián)瓜爾多糖凝膠法進(jìn)行分離提純而獲得，在細(xì)胞凝集試驗(yàn)中，以2倍稀釋法設(shè)定SBA的

2、濃度梯度，在可發(fā)生凝集作用的有效時(shí)間后，測(cè)定上清液620nm處的吸光值；在吸附測(cè)定試驗(yàn)中，所用ELLSA法是直接以SBA為抗體，用辣根過氧化物酶進(jìn)行標(biāo)記，標(biāo)記抗體與小腸樣品反應(yīng)后，通過測(cè)定酶活性(OD495nm)來間接反應(yīng)腸黏膜與SBA的結(jié)合能力，試驗(yàn)設(shè)九個(gè)SBA濃度梯度。 SBA與未經(jīng)修飾紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)表明：兔對(duì)SBA極為敏感，豬次之，山羊只在特定濃度區(qū)間發(fā)生凝聚反應(yīng)，雞、鵝和狗未發(fā)生凝集反應(yīng)。對(duì)兔來說，SBA稀釋度從2倍到

3、64倍這個(gè)區(qū)間，其OD值幾乎為零，發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng)；稀釋到1024倍，SBA濃度為1.5×10-3mg/ml時(shí)，紅細(xì)胞懸浮液的OD值與空白對(duì)照管基本相同，無凝集現(xiàn)象發(fā)生，此時(shí)可能達(dá)到了臨界濃度。對(duì)豬來說，SBA稀釋度在16倍前，發(fā)生強(qiáng)凝集反應(yīng)；稀釋到128倍，SBA濃度為1.25×10-2時(shí)，無凝集反應(yīng)發(fā)生。羊的情況較特殊，只在SBA被稀釋8倍到64倍之間時(shí)發(fā)生弱凝集反應(yīng)，其它濃度時(shí)無凝集現(xiàn)象。 SBA與胰酶修飾紅細(xì)胞的凝集反應(yīng)表

4、明：紅細(xì)胞經(jīng)修飾后，某些動(dòng)物對(duì)SBA更為敏感。修飾后，兔紅細(xì)胞在SBA稀釋到4096倍才無凝集反應(yīng)，臨界濃度可能為3.93×10-4mg/ml，敏感程度提高了4倍；豬的紅細(xì)胞在SBA稀釋到1024倍時(shí)，無凝集反應(yīng)，臨界濃度為1.5×10-3mg/ml，敏感程度提高了6-8倍；雞的紅細(xì)胞經(jīng)胰酶修飾前，無凝集作用發(fā)生，而修飾后，在SBA稀釋到2倍至4倍時(shí)發(fā)生弱凝集反應(yīng)；山羊的紅細(xì)胞經(jīng)胰酶修飾以后，反而無凝集作用發(fā)生，但不能斷言其無SBA結(jié)合

5、位點(diǎn)，可能是因?yàn)樯窖虻募t細(xì)胞不適合被胰酶修；鵝、狗紅細(xì)胞依然無凝集反應(yīng)。 SBA與脾淋巴細(xì)胞的凝集反應(yīng)表明：六種動(dòng)物的淋巴細(xì)胞均不同程度地與SBA發(fā)生了凝集反應(yīng)。兔最敏感，最高稀釋度為64倍，臨界濃度為0.025mg/ml；鵝、狗、雞最高稀釋度為16倍，臨界濃度為0.1mg/ml；豬的最高稀釋度為8倍，臨界濃度為0.2mg/ml；羊的最高稀釋度為4倍，臨界濃度為0.4mg/ml。 ELLSA法吸附測(cè)定結(jié)果表明：以10倍稀

6、釋時(shí)，不同種屬動(dòng)物間的離散性最高，粘膜樣本F值為50.02，小腸組織樣本F值為74.88，說明SBA的濃度越高種間差異越明顯。對(duì)腸粘膜來說，SBA稀釋10倍時(shí)，結(jié)合程度排序?yàn)殡u、兔、狗、鵝、豬、山羊。雞和兔與其它動(dòng)物差異顯著(P＜0.05)，二者之間差異不顯著(P＞0.05)；狗與其它動(dòng)物差異顯著(P＜0.05)；鵝、豬、山羊與其它動(dòng)物差異顯著(P＜0.05)，三者之間差異不顯著(P＞0.05)。到30000倍時(shí)，除雞、羊外，其它四種動(dòng)