綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)化早花檸檬創(chuàng)制新種質(zhì).pdf

1、柑橘是世界上重要的水果之一。但柑橘存在童期長(zhǎng)的問題，嚴(yán)重影響了傳統(tǒng)育種方法的效率。近年來不斷發(fā)展的轉(zhuǎn)基因技術(shù)為柑橘研究提供了更快速的方法，而采用短童期材料可加速研究進(jìn)程。
　　本實(shí)驗(yàn)以短童期材料-早花檸檬的試管實(shí)生苗上胚軸為外植體，采用根癌農(nóng)桿菌介導(dǎo)法進(jìn)行綠色熒光蛋白基因轉(zhuǎn)化，最終得到了8株轉(zhuǎn)基因再生植株。同時(shí)對(duì)影響早花檸檬轉(zhuǎn)化效率的因素進(jìn)行了探討。主要結(jié)果如下:
　　1.轉(zhuǎn)綠色熒光蛋白基因早花檸檬植株再生。共進(jìn)行了7批材料

2、的轉(zhuǎn)化，總計(jì)2215個(gè)莖段，平均再生芽率60.6％，最高達(dá)75％。經(jīng)體式熒光顯微鏡檢測(cè)，表明再生芽平均陽(yáng)性率1.8％，最高達(dá)2.8％。最終8個(gè)陽(yáng)性芽生根并移栽至溫室;再生植株莖段和葉片熒光明顯，經(jīng)PCR檢測(cè)為陽(yáng)性，表明再生植株均為陽(yáng)性植株。
　　2.影響轉(zhuǎn)化效率的因素研究。分別設(shè)置3個(gè)乙酰丁香酮和農(nóng)桿菌濃度，發(fā)現(xiàn)乙酰丁香酮濃度變化對(duì)轉(zhuǎn)化率影響不大;轉(zhuǎn)化率隨著農(nóng)桿菌濃度增加而降低，農(nóng)桿菌濃度OD600在0.6最適宜。轉(zhuǎn)化過程中發(fā)現(xiàn)，