重組腺病毒rAd一EGF轉(zhuǎn)染hDPSCs對其增殖影響的體外研究.pdf

1、中圖分類號：中圖分類號：R781；R329.28碩士學(xué)位論文重組腺病毒重組腺病毒rAdrAd一EGFEGF轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)染hDPSCshDPSCs對其增殖對其增殖影響影響的體外研究的體外研究院（系）、所院（系）、所口腔醫(yī)學(xué)院研究生姓名研究生姓名付廣麗學(xué)科、專學(xué)科、專業(yè)口腔臨床口腔臨床醫(yī)學(xué)醫(yī)學(xué)導(dǎo)師姓導(dǎo)師姓名劉興容教授二Ο一二年四月年四月重組腺病毒rAd一EGF轉(zhuǎn)染hDPSCs對其增殖影響的體外研究摘要目的：通過體外培養(yǎng)人牙髓干細(xì)胞（humande

2、ntalpulpstemcells，hDPSCs），觀察腺病毒rAdEGF轉(zhuǎn)染至hDPSCs后對其生長、增殖和凋亡的影響，為EGF對hDPSCs的作用提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)，并為牙齒缺損與牙再生提供可能的新思路和新方法。方法：1.常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs，將密度為1105ml的細(xì)胞懸液接種至6孔板中，每孔細(xì)胞懸液量為2ml，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃榭瞻捉M（只有hDPSCs和培養(yǎng)基）、陰性對照組（轉(zhuǎn)染腺病毒rAdEGFP的hDPSCs）和實(shí)驗(yàn)組（轉(zhuǎn)

3、染腺病毒rAdEGF的hDPSCs），待24h細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染腺病毒rAdEGFP與rAdEGF，在72h后采用RTPCR檢測腺病毒rAdEGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后對EGFmRNA表達(dá)的影響情況。2.體外培養(yǎng)hDPSCs，常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs，將密度為4103ml的細(xì)胞懸液接種于96孔板中，每孔細(xì)胞懸液量為200μl，根據(jù)實(shí)驗(yàn)?zāi)康姆譃榭瞻捉M、陰性對照組和實(shí)驗(yàn)組。待24h細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染腺病毒rAdEGFP與rAdEGF，在1、3、

4、5、7、9、11d的同一時(shí)點(diǎn)，采用MTT比色法觀察腺病毒rAdEGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后對其體外增殖能力的影響。3.常規(guī)收集對數(shù)生長期的hDPSCs，將密度為3106ml的細(xì)胞懸液接種于6孔板中，每孔細(xì)胞貼壁后轉(zhuǎn)染腺病毒rAdEGFP與rAdEGF，繼續(xù)培養(yǎng)48h，用流式細(xì)胞儀AnnexinVFITCPI法檢測腺病毒rAdEGF轉(zhuǎn)染hDPSCs后的凋亡情況。結(jié)果:實(shí)驗(yàn)組hDPSCs中EGFmRNA的表達(dá)水平相對于陰性對照組與空白組均明顯上