BMP4 shRNA重組腺病毒的構(gòu)建及其對(duì)GH3細(xì)胞增殖及PRL分泌的影響.pdf

1、目的:研究干擾BMP-4基因表達(dá)后對(duì)大鼠垂體瘤GH3細(xì)胞增殖和泌乳素分泌能力的影響,觀察腺病毒對(duì)GH3細(xì)胞感染的敏感性,為基因治療在控制人垂體腺瘤細(xì)胞生長(zhǎng)及激素分泌的應(yīng)用上提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:(1)設(shè)計(jì)并構(gòu)建表達(dá)特異性BMP-4 shRNA的重組腺病毒載體。(2)用構(gòu)建的靶向BMP4的shRNA并攜帶有EGFP基因的重組腺病毒(rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA)感染GH3細(xì)胞,應(yīng)用RT-PCR

2、和Western Blot方法檢測(cè)BMP-4基因的干擾效果。(3) Western Blot檢測(cè)rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細(xì)胞后EGFR蛋白的變化。(4) MTS檢測(cè)rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞增殖的影響。(5) ELISA檢測(cè)rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細(xì)胞后對(duì)細(xì)胞PRL分泌的影響。
　　結(jié)果:(

3、1)成功設(shè)計(jì)并構(gòu)建攜帶靶向BMP4的shRNA的重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA,并成功轉(zhuǎn)染包裝細(xì)胞,得到高滴度的重組腺病毒。(2)重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA感染GH3細(xì)胞后,BMP4-mRNA和蛋白都受到明顯抑制。(3) BMP4被干擾后,EGFR蛋白的表達(dá)也下調(diào)了。(4) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細(xì)胞后,MTS檢測(cè)提示較