BMP4 shRNA重組腺病毒的構(gòu)建及其對GH3細胞增殖及PRL分泌的影響.pdf

1、目的:研究干擾BMP-4基因表達后對大鼠垂體瘤GH3細胞增殖和泌乳素分泌能力的影響,觀察腺病毒對GH3細胞感染的敏感性,為基因治療在控制人垂體腺瘤細胞生長及激素分泌的應(yīng)用上提供實驗基礎(chǔ)和理論依據(jù)。
　　方法:(1)設(shè)計并構(gòu)建表達特異性BMP-4 shRNA的重組腺病毒載體。(2)用構(gòu)建的靶向BMP4的shRNA并攜帶有EGFP基因的重組腺病毒(rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA)感染GH3細胞,應(yīng)用RT-PCR

2、和Western Blot方法檢測BMP-4基因的干擾效果。(3) Western Blot檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后EGFR蛋白的變化。(4) MTS檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后對細胞增殖的影響。(5) ELISA檢測rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后對細胞PRL分泌的影響。
　　結(jié)果:(

3、1)成功設(shè)計并構(gòu)建攜帶靶向BMP4的shRNA的重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA,并成功轉(zhuǎn)染包裝細胞,得到高滴度的重組腺病毒。(2)重組腺病毒rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA感染GH3細胞后,BMP4-mRNA和蛋白都受到明顯抑制。(3) BMP4被干擾后,EGFR蛋白的表達也下調(diào)了。(4) rAd5-EGFP-BMP41+2+3+4 shRNA成功感染GH3細胞后,MTS檢測提示較