2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、目的:
   乳腺癌是在當前女性患者中發(fā)病率最高的惡性腫瘤,淋巴轉移是乳腺癌細胞向全身擴散的一個重要途徑。Survivin是凋亡抑制蛋白家族(Inhibitor of apoptosis proteins,IAPs)的一個成員,它負責調節(jié)兩個重要的細胞過程,即抑制細胞凋亡和促進細胞增殖。Survivin在胎兒發(fā)育時期呈高表達,但在健康的成人正常組織中表達極少。然而,在大多數(shù)惡性腫瘤中,其又是高表達的。因此survivin可以作為

2、一個潛在腫瘤標記物同時也可以作為腫瘤治療的靶標。同時,survivin也是與淋巴轉移有關的凋亡調節(jié)因子。已有研究表明,survivin的表達與乳腺癌等多種惡性腫瘤的淋巴結轉移密切相關。
   VEGF-C(Vascular endothelial growth factor-C)是血管內皮細胞生長因子家族的成員之一,也是調節(jié)淋巴管生成的重要因子。VEGF-C是目前發(fā)現(xiàn)的最重要的淋巴管生成相關因子,其通過與淋巴內皮細胞上的同族受體

3、酪氨酸激酶VEGFR-3。對不同類型的腫瘤進行的研究表明,上調VEGF-C的表達能促進腫瘤淋巴管的形成并增加腫瘤細胞向淋巴結轉移的幾率。VEGF-C的表達能在腫瘤的內部或者周圍形成大量的淋巴管道,以此來促進腫瘤向淋巴結甚至遠處的器官轉移。此外,VEGF-C也能在淋巴結中促進形成新的淋巴管。在化學誘導的皮膚癌變模型中,研究發(fā)現(xiàn)VEGF-C促使的前哨淋巴結腫淋巴管網(wǎng)絡的擴張是先于腫瘤轉移發(fā)生的。目前,在胃癌,結直腸癌等多種腫瘤中發(fā)現(xiàn)VEGF

4、-C的表達與淋巴管道的生成、淋巴結轉移甚至患者的預后呈正相關。
   Survivin的另一被證明的作用是能夠促進腫瘤內新生血管的生成。實驗顯示靶向抑制survivin的表達后,可以通過促進腫瘤細胞死亡和阻止新生血管生成來抑制腫瘤的生長。Survivin的這個作用被發(fā)現(xiàn)與血管內皮細胞生長因子家族中的VEGF有密切關系。
   如上所述,survivin和VEGF-C在腫瘤淋巴轉移中所起到的作用已經(jīng)被認知,然而,兩者之間是

5、否存在聯(lián)系的討論尚缺乏。本文擬通過研究survivin與VEGF-C在乳腺癌細胞、乳腺癌組織和乳腺癌腋窩淋巴結中表達的相互關系,從而深入探討survivin和VEGF-C在乳腺癌淋巴轉移中的重要作用,為乳腺癌患者的淋巴轉移情況預測和病情評估找到合適的指標。并為治療乳腺癌淋巴轉移以及遠處轉移提供準確的靶向目標。
   材料和方法:
   1、本實驗的研究對象為人乳腺癌細胞株ZR-75-30和人乳腺癌組織、腋窩淋巴結組織。<

6、br>   2、構建攜帶針對survivin和VEGF-C的shRNA質粒載體和攜帶擴增survivin的慢病毒載體。通過脂質體法將質粒轉染到ZR-75-30乳腺癌細胞中。按MOI=20將慢病毒轉染到ZR-75-30乳腺癌細胞中。轉染成功后,通過熒光顯微鏡觀察綠色熒光蛋白的表達來檢測質粒和慢病毒的轉染效率。
   3、設計空白對照組,陰性質粒對照組,陰性慢病毒對照組,survivin-shRNA質粒組,VEGF-C-shRNA

7、質粒組,survivin慢病毒組和survivin慢病毒轉染VEGF-C-shRNA質粒組。
   4、通過蛋白質電泳觀察survivin和VEGF-C在不同組別中的蛋白水平的表達。
   5、通過real-time PCR技術觀察survivin和VEGF-C在不同組別中的mRNA水平的表達。
   6、使用Transwell小室,通過細胞侵襲實驗觀察經(jīng)轉染survivin慢病毒和VEGF-C-shRNA質粒的

8、乳腺癌細胞的侵襲能力的變化。
   7、收集乳腺癌組織和腋窩淋巴結組織樣本,通過免疫組織化學分析survivin和VEGF-C在108例乳腺癌組織和腋窩淋巴組織的表達情況,以及它們與患者的臨床病理特征之間的關系,并進行統(tǒng)計學分析。觀察survivin和VEGF-C表達的相關性及兩者表達與乳腺癌患者陽性淋巴結轉移的關系。
   結果:
   1、經(jīng)質粒轉染的ZR-75-30細胞在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,質粒感染

9、率為70%。
   2、經(jīng)慢病毒轉染的ZR-75-30細胞在熒光顯微鏡下觀察到綠色熒光,慢病毒感染率為100%。
   3、蛋白質電泳發(fā)現(xiàn)經(jīng)質粒轉染的細胞表達survivin和VEGF-C水平降低,經(jīng)慢病毒轉染的細胞表達survivin水平升高。
   4、在蛋白水平和mRNA水平,VEGF-C在ZR-75-30細胞中的表達隨survivin表達的升高而升高,隨survivin表達的降低而降低。其中,mRNA水平

10、上,在survivin-shRNA質粒組和survivin慢病毒組中VEGF-C的表達與空白對照組相比出現(xiàn)明顯下降(p<0.05)和升高(p<0.05)。
   5、細胞侵襲實驗中,survivin慢病毒組的侵襲細胞數(shù)目(72,±3.06)高于空白對照組(30,±5.29)(p<0.05),慢病毒轉染VEGF-C-shRNA質粒組的侵襲細胞數(shù)目(27,±3.61)低于survivin慢病毒組(72,±3.06)(p<0.05)。

11、
   6、免疫組化結果顯示,在乳腺癌組織中,VEGF-C的表達與survivin表達密切相關(p<0.05)。在有淋巴結轉移的患者中,survivin和VEGF-C的共表達高于任一指標的表達(p<0.05)。
   結論:
   1、在乳腺癌的淋巴轉移過程中,survivin參與調節(jié)VEGF-C的表達。
   2、VEGF-C能夠調控survivin介導的乳腺癌細胞的侵襲能力。
   3、在乳腺

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