肝硬化門靜脈高壓大鼠VEGF轉(zhuǎn)基因前后肝臟超微結(jié)構(gòu)的改變及機制.pdf

1、目的：本研究以硫代乙酰胺復(fù)制門脈高壓大鼠模型，VEGF-D通過門靜脈轉(zhuǎn)染大鼠活體肝臟，對轉(zhuǎn)染后的肝臟超微結(jié)構(gòu)進行觀察，進一步闡明VEGF降低門靜脈壓力的作用原理，并通過血管生成基因芯片探討VEGF-D引起肝臟超微結(jié)構(gòu)改變的機制。 方法：50只大鼠分為造模組(40只)和正常對照組(10只)。造模組采取前5周使用0.03％的硫代乙酰胺，后5周使用0.04％硫代乙酰胺作為其飲用水，共誘導(dǎo)10周成模。對成模大鼠測定腸系膜上靜脈壓力，取硬

2、化后肝臟標(biāo)本，并門靜脈內(nèi)注入PCHO/hVEGF質(zhì)粒150μg。飼養(yǎng)三周后重復(fù)測定門靜脈壓力，處死全部大鼠，取肝組織標(biāo)本。對收集后標(biāo)本行VEGF免疫組化染色，觀察VEGF表達情況。并行電子顯微鏡觀察轉(zhuǎn)基因前后肝臟超微結(jié)構(gòu)變化，取肝臟組織行基因芯片實驗，比較轉(zhuǎn)基因前后血管生成相關(guān)基因的變化。 結(jié)果：硬化肝臟PCHO/hVEGF質(zhì)粒經(jīng)門靜脈轉(zhuǎn)基因后，伴隨VEGF蛋白表達增加，門靜脈壓力顯著降低。電鏡結(jié)果顯示肝竇毛細血管化在硫代乙酰胺

3、誘導(dǎo)的肝硬化門脈高壓發(fā)生中起重要作用，肝竇內(nèi)皮細胞窗孔減少并減小，內(nèi)皮細胞下基底膜形成使肝細胞與外界物質(zhì)交換減少，導(dǎo)致細胞缺氧、代謝產(chǎn)物聚集，肝細胞壞死，是門脈高壓發(fā)生過程中基本的病理生理改變。VEGF轉(zhuǎn)基因有促進肝竇內(nèi)皮細胞生長，窗孔增加，基底膜降解的作用，因此肝細胞與外界物質(zhì)的交換恢復(fù)，肝細胞再生，門脈壓力降低。VEGF轉(zhuǎn)基因，是通過眾多生長因子的交互作用，促進肝竇內(nèi)皮細胞生長，基底膜降解的，其中包括血管內(nèi)皮細胞生長因子Figf(V

4、EGFD)、Pgf、Vegf、Vegfb、Vegfc；Ephrin家族Efna2(EphrinA2)、Efnb2(EphrinB2)、Ephb4(EphrinB4)；成纖維細胞生長因子Fgfl(aFGF)、Fgf6和其受體Fgfr3；血小板源性生長因子和受體：Pdgfa、Pdgfb和其受體Pdgfrb，轉(zhuǎn)化生長因子和受體Tgfbl、Tgfb2、Tgfb3和其受體Tgfbr2；其他生長因子：組織生長因子Ctgf、表皮生長因子Egf，胰島素