姬松茸多糖對(duì)鎘中毒雞外周血淋巴細(xì)胞和脾臟中MDA5信號(hào)通路及抗氧化水平的影響.pdf

1、鎘(Cd)中毒后，可對(duì)人和動(dòng)物的心血管、肝、腎、生殖系統(tǒng)及免疫器官造成損傷。姬松茸多糖(ABP)是從姬松茸中提取的具有免疫調(diào)節(jié)、抗氧化和抗炎癥等生物學(xué)活性的一種多糖。本試驗(yàn)以7日齡海蘭白雞為研究對(duì)象，在建立雞鎘中毒模型的基礎(chǔ)上，研究ABP對(duì)鎘中毒雞外周血淋巴細(xì)胞和脾臟MDA5信號(hào)通路及抗氧化功能的影響，以期明確ABP對(duì)鎘中毒雞外周免疫損傷的干預(yù)機(jī)制。
　　將80只7日齡海蘭白雞隨機(jī)分成四組，即對(duì)照組(Control)、鎘中毒模型組

2、(Cd)、姬松茸多糖組(ABP)和鎘+姬松茸多糖組(Cd+ABP)。Control組，飼喂正常全價(jià)飼料，每只灌注0.2 mL生理鹽水;Cd組，飼喂混有140 mg/Kg CdC12的正常全價(jià)飼料，連續(xù)飼喂2個(gè)月;ABP組，飼喂正常全價(jià)飼料，同時(shí)每天口服0.2 mL ABP（濃度為30 mg/mL）;Cd+ABP組，即Control組和ABP組結(jié)合，分別在第20天、第40天和第60天取樣。首先，每組隨機(jī)抽取5只雞進(jìn)行心臟采血，用于分離淋巴

3、細(xì)胞和收集血清;快速分離脾臟，取部分固定于4％多聚甲醛溶液中。分離的淋巴細(xì)胞與剩余的脾臟分成四部分，一部分用電感耦合等離子質(zhì)譜法檢測(cè)鎘含量;對(duì)一部分淋巴細(xì)胞和脾臟進(jìn)行總RNA的提取，反轉(zhuǎn)錄成cDNA，通過(guò)實(shí)時(shí)熒光定量PCR法檢測(cè)MDA5及信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路銜接蛋白IPS-1、轉(zhuǎn)錄因子(IRF3、NF-κB)的mRNA水平;對(duì)另部分淋巴細(xì)胞和脾臟進(jìn)行蛋白的提取，用Western Blot法檢測(cè)MDA5蛋白表達(dá);將剩余的淋巴細(xì)胞用1640完全培養(yǎng)

4、液培養(yǎng)24 h，收集上清，剩余的脾臟用生理鹽水進(jìn)行勻漿，一同用ELISA方法分別檢測(cè)細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-β的含量;檢測(cè)淋巴細(xì)胞培養(yǎng)上清液和脾臟勻漿抗氧化指標(biāo)（SOD、MDA和GSH-Px）;并對(duì)雞脾臟進(jìn)行病理組織學(xué)檢測(cè)。結(jié)果發(fā)現(xiàn):(1) Cd+ABP組雞外周血液和脾臟中鎘含量較Cd組極顯著降低(P＜0.01);(2)鎘中毒后雞外周血淋巴細(xì)胞和脾臟中MDA5的mRNA水平和蛋白表達(dá)均有升高，且隨著鎘中毒時(shí)間的

5、增加MDA5的表達(dá)量也隨之增加，而灌服ABP后其表達(dá)量有明顯的下調(diào);MDA5信號(hào)通路相關(guān)分子IPS-1、IRF3、NF-κB的表達(dá)變化規(guī)律與MDA5相同;(3) Cd組雞外周血淋巴細(xì)胞和脾臟中細(xì)胞因子IL-1β、IL-6、TNF-α和IFN-β含量升高，且均極顯著高于Control組和ABP組(P＜0.01)，口服ABP后這些細(xì)胞因子含量均極顯著下調(diào)(P＜0.01);(4)Cd+ABP雞外周血淋巴細(xì)胞上清液和脾臟中MDA含量極顯著降低(

6、P＜0.01)，SOD和GSH-Px活性極顯著升高(P＜0.01);(5)鎘中毒后雞脾臟病理組織學(xué)變化表現(xiàn)為淋巴細(xì)胞數(shù)量明顯減少，紅髓、白髓界限不清，而Cd+ABP組雞脾臟結(jié)構(gòu)較Cd組有明顯改善，淋巴細(xì)胞數(shù)量增多，且細(xì)胞排列緊湊，紅髓、白髓界限較清晰。
　　綜上所述，ABP能減少鎘在雞外周血液和脾臟中的蓄積，降低鎘中毒雞外周血淋巴細(xì)胞中MDA5及其下游信號(hào)分子的表達(dá)及細(xì)胞因子含量，顯著提高抗氧化酶(SOD、GSH-Px)的活性，降