替來他明與曲馬多對(duì)大鼠不同腦區(qū)LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)傳導(dǎo)通路的影響.pdf

1、小型豬復(fù)合麻醉劑(XFM)是課題組根據(jù)小型豬的生理特點(diǎn)和平衡麻醉理論，研制出的一種小型豬專用的復(fù)合麻醉劑，具有麻醉誘導(dǎo)時(shí)間短、麻醉維持時(shí)間適宜、副作用小的優(yōu)點(diǎn)。替來他明和曲馬多作為XFM的成份之一，均作用于動(dòng)物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)，并且都具有確實(shí)的鎮(zhèn)痛效果。最新的研究證明:LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路中的關(guān)鍵蛋白參與了機(jī)體疼痛和神經(jīng)元興奮性的調(diào)節(jié)，推測(cè)LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路可能參與了麻醉的鎮(zhèn)痛調(diào)控。所以本實(shí)驗(yàn)通過

2、給大鼠腹腔注射生理鹽水、鹽酸替來他明和鹽酸曲馬多，利用分子生物學(xué)技術(shù)檢測(cè)藥物注射后不同時(shí)間中樞神經(jīng)系統(tǒng)（大腦皮層、海馬、丘腦、小腦、腦干）中LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)通路的關(guān)鍵蛋白基因的轉(zhuǎn)錄量和蛋白的磷酸化水平，進(jìn)而探討他們的鎮(zhèn)痛機(jī)制，從而推測(cè)XFM的全麻鎮(zhèn)痛機(jī)理。
　　將54只SD大鼠隨機(jī)分為對(duì)照組(n=6)、麻醉組(n=24)和鎮(zhèn)痛組(n=24)。各組大鼠分別腹腔注射生理鹽水、鹽酸替來他明或鹽酸曲馬多后，對(duì)照組大鼠在注射

3、生理鹽水后10 min頸椎脫臼處死，麻醉組和鎮(zhèn)痛組根據(jù)注射藥物后10 min、20 min、40 min和60 min分為四個(gè)亞組(n=6)，分別在相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)頸椎脫臼處死，并迅速采集大腦皮層、海馬、丘腦、小腦和腦干部位，利用RT-PCR檢測(cè)樣品中LKB1 mRNA、AMPKα1 mRNA、AMPKα2 mRNA和4EBP1mRNA的相對(duì)轉(zhuǎn)錄量，利用Western-blot方法檢測(cè)各樣品p-LKB1/LKB1、p-AMPK/AMPK和p-

4、4EBP1/4EBP1蛋白磷酸化水平。
　　實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明:
　　(1)替來他明和曲馬多能使LKB1 mRNA、AMPKα1 mRNA和AMPKα2 mRNA的轉(zhuǎn)錄量極顯著性升高(p＜0.01)，而抑制4EBP1 mRNA的轉(zhuǎn)錄量(p＜0.01)。
　　(2)替來他明和曲馬多能促進(jìn)LKB1和AMPK的磷酸化水平(p＜0.01)，相反抑制了4EBP1的磷酸化水平(p＜0.01)。
　　(3)在大鼠的中樞神經(jīng)系統(tǒng)中，替

5、來他明和曲馬多在海馬、丘腦、小腦以及腦干區(qū)表現(xiàn)出高效的調(diào)節(jié)作用，且多為藥物注射后的20 min和40 min。
　　綜上，實(shí)驗(yàn)得出結(jié)論:LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)通路參與了替來他明和曲馬多的麻醉、鎮(zhèn)痛調(diào)節(jié)，而大鼠的海馬、小腦、丘腦、腦干可能是LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)通路參與麻醉與鎮(zhèn)痛的靶位;通過激活LKB1-AMPK-mTOR信號(hào)通路作用于該藥物相對(duì)應(yīng)的靶蛋白上產(chǎn)生麻醉、鎮(zhèn)痛作用可能是替來他明和曲馬多的作用機(jī)制，