EB病毒潛伏膜蛋白2A（LMP2A）重組腺病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細胞治療小鼠移植瘤模型的研究.pdf

1、目的構(gòu)建表達EB病毒LMP2A的小鼠移植腫瘤模型,用EB病毒LMP2A重組腺病毒轉(zhuǎn)染小鼠樹突狀細胞治療該小鼠腫瘤模型并評價其療效,為研究以DC為基礎(chǔ)的EBV相關(guān)腫瘤的免疫治療提供有益資料.方法將EB病毒LMP2A基因克隆至逆轉(zhuǎn)錄質(zhì)粒pLXSN中,重組質(zhì)粒用脂質(zhì)體Clonfectin轉(zhuǎn)入BALB/c小鼠來源的骨髓瘤細胞SP2/0,經(jīng)G418篩選獲得陽性克隆并經(jīng)PCR、RT-PCR、間接免疫熒光、流式細胞儀鑒定.腹股溝皮下接種該細胞入BAL

2、B/c小鼠得到移植瘤模型,兩周后切除腫瘤組織并作蘇木素-伊紅(H&E)染色切片.Inaba法分離并體外誘導(dǎo)BALB/c小鼠骨髓樹突狀細胞,第七天用重組腺病毒轉(zhuǎn)染樹突狀細胞并以脂多糖(LPS)誘導(dǎo)成熟.流式細胞術(shù)鑒定樹突狀細胞表面分子的表達,MLR法檢測樹突狀細胞刺激同種異體淋巴細胞增殖能力.樹突狀細胞皮下回輸小鼠荷瘤模型,觀察腫瘤生長情況、生存期.LDH釋放法檢測小鼠體內(nèi)CTL的殺傷活性.標(biāo)準(zhǔn)ELISA法檢測特異性CTL的IFN-γ分泌

3、情況.結(jié)論:將EB病毒LMP2A基因整合入BALB/c小鼠來源的腫瘤細胞SP2/0細胞并表達.成功地構(gòu)建表達EB病毒潛伏膜蛋白2A(LMP2A)的小鼠移植瘤模型.為樹突狀細胞治療EB病毒相關(guān)腫瘤的動物試驗奠定基礎(chǔ).利用含有EB病毒LMP2A的重組腺病毒將LMP2A轉(zhuǎn)入小鼠樹突狀細胞,該樹突狀細胞可以在體內(nèi)誘導(dǎo)出針對EB病毒LMP2A的特異性CTL,誘導(dǎo)出的CTL對表達LMP2A的腫瘤細胞有較強的殺傷能力,并可分泌Th1型細胞因子IFN-