口腔幽門螺桿菌與口腔潰瘍及消化道疾病相關(guān)性的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、幽門螺桿菌(helicobacterpylori，Hp)是公認(rèn)的慢性活動(dòng)性胃炎(gastritis)的致病菌，是消化性潰瘍(pepticulcer，PU)的重要致病因子，并與胃癌(gastriccarcinoma)、胃粘膜相關(guān)惡性淋巴瘤(mucosa-associatedlymphoidtissue，MALT)密切相關(guān)。1989年，Kragden首次從胃炎患者牙菌斑中分離出Hp之后，Majmudar等用細(xì)菌培養(yǎng)法(germicultur

2、e)和尿素酶檢測(cè)法(rapidureasetest，RUT)發(fā)現(xiàn)40例健康志愿者牙菌斑中均有Hp菌株，而且與胃內(nèi)的Hp菌株具有相同的形態(tài)、生化、免疫學(xué)特征。 口腔粘膜病(oralmucosaldiseases)特別是復(fù)發(fā)性口腔潰瘍(recurrentaphthousulcer，RAU)與Hp的關(guān)系受到廣泛關(guān)注?？谇皇窍赖氖级?，其解剖結(jié)構(gòu)與胃腸道有許多共性，口腔疾病與胃腸疾病有著不可割舍的聯(lián)系，致病菌依然。由于消化道和口腔之間

3、存在著相同的組織共性，而口腔粘膜和胃壁粘膜同屬消化系統(tǒng)，均來(lái)自于外胚層，考慮彼此可能有共同的抗原成分，當(dāng)來(lái)自口腔粘膜和(或)胃壁粘膜的自身抗原刺激機(jī)體時(shí)，從而引發(fā)免疫學(xué)變化。因此，我們提出這樣的疑問(wèn)：RAU和消化道疾病的相關(guān)性如何?口腔Hp是不是RAU的致病因素之一?目的意義：隨著口腔內(nèi)Hp的發(fā)現(xiàn)，RAU與口腔Hp感染的關(guān)系引起廣泛關(guān)注，但未得到充分的證實(shí)。因此我們將進(jìn)行：①對(duì)消化道疾病患者進(jìn)行RAU發(fā)病的臨床調(diào)查，初步研究RAU及消化

4、道疾病的相關(guān)性。②調(diào)查了解不同消化道疾病患者RAU的發(fā)病率，同時(shí)比較同一患者不同部位(胃粘膜組織和口腔唾液)Hp菌株的檢出率，檢測(cè)伴發(fā)RAU的消化道疾病患者，口腔內(nèi)是否存在Hp的感染。比較RAU和非RAU患者口腔Hp菌株的檢出率，并進(jìn)一步分析同一患者口腔和胃內(nèi)的Hp菌株基因型的異同。初步探討口腔Hp與RAU發(fā)病及消化道疾病的關(guān)系，為RAU及消化道疾病的防治提供依據(jù)。 材料與方法：①隨機(jī)選取2004年5月～2004年8月在南方醫(yī)院

5、消化科胃腸鏡室，進(jìn)行胃鏡檢查的246例患者，男性140例，女性106例，年齡15～90歲(平均年齡40.4歲)。對(duì)患者采用統(tǒng)一設(shè)計(jì)的記錄表格詳細(xì)記錄調(diào)查相關(guān)內(nèi)容，進(jìn)行性別、年齡、職業(yè)、用藥史、消化道疾病的分類診斷(以當(dāng)日胃鏡檢查結(jié)果為依據(jù))、消化道疾病發(fā)病時(shí)間、口腔狀況(包括：牙齒個(gè)數(shù)、牙齦是否健康、牙周情況等)、口腔潰瘍?cè)\斷(包括：既往史、現(xiàn)病史、發(fā)病周期、發(fā)病部位、發(fā)病個(gè)數(shù)、潰瘍面積大小、自愈合時(shí)間以及與消化道疾病發(fā)病時(shí)間的關(guān)聯(lián)等)

6、、有無(wú)反酸、家族史(直系親屬口腔潰瘍發(fā)病史)的問(wèn)卷調(diào)查及口腔綜合檢查。②收集246例患者的胃粘膜和唾液標(biāo)本，運(yùn)用細(xì)菌培養(yǎng)、PCR技術(shù)(依據(jù)Hp種系特異性抗原基因：16SrRNA、尿素酶基因A、細(xì)胞毒素相關(guān)基因A的基因信號(hào)序列為模板設(shè)計(jì)引物)和尿素酶實(shí)驗(yàn)(rapidureasetest，RUT)方法，檢測(cè)口腔及胃內(nèi)的Hp菌株。對(duì)于胃粘膜和唾液標(biāo)本Hp菌株P(guān)CR的陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行單鏈構(gòu)象多態(tài)性分析(Single-StrandConformati

7、onPolymorphism，SSCP)，鑒定同一個(gè)體胃粘膜和唾液Hp菌株的基因型。③應(yīng)用SPSS11.0統(tǒng)計(jì)軟件分析實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)。 結(jié)果：①所收集246例患者中，男性140例，占56.91％(140/246)；女性106例，占43.09％(106/246)；慢性胃炎患者占69.51％(171/246)；消化性潰瘍(PU)患者占30.49％(75/246)?？谇粷兓颊?包括現(xiàn)病史和既往史)103例，占41.87％(103/246)

8、，輕型80.58％(83/103)、重型19.42％(20/103)，未發(fā)現(xiàn)皰疹樣潰瘍；其中男、女性RAU發(fā)病率分別為：40.71％(57/140)和43.40％(46/106)，比較男、女性RAU發(fā)病率無(wú)顯著差異(P＞0.01)；慢性胃炎患者和PU患者RAU發(fā)病率分別為：39.76％(68/171)和46.67％(35/75)，比較慢性胃炎及PU患者RAU發(fā)病率無(wú)顯著差異(P＞0.01)。消化道疾病患者RAU的發(fā)病率(41.87％)和

9、健康人群RAU的發(fā)病率(20％)比較差異顯著(P＜0.01)，即消化道疾病患者RAU發(fā)病率顯著高于健康人群。103例RAU患者(包括現(xiàn)病史和既往史)中有83.50％(86/103)的患者口腔狀況偏差(即有口臭或口腔異味重，有明顯牙結(jié)石、軟垢、食物殘?jiān)鼫?。246例患者中有44.31％(109/246)的患者伴有不同程度的反酸癥狀，其中RAU發(fā)病率為69.72％(76/109)，與無(wú)反酸癥狀者RAU發(fā)病率19.71％(27/137)比較

10、差異顯著(P＜0.01)。②應(yīng)用三種引物：16SrRNA、尿素酶基因A、細(xì)胞毒素相關(guān)基因A的PCR技術(shù)檢測(cè)246例患者胃粘膜和唾液標(biāo)本Hp的陽(yáng)性率，結(jié)果表明RAU患者胃粘膜和唾液中Hp檢出率均顯著高于非RAU患者，且引物16SrRNA的PCR檢測(cè)胃粘膜和唾液Hp檢出率最高。三種引物PCR檢測(cè)246例患者胃粘膜Hp菌株均為陰性的30例患者中，有16.67％(5/30)唾液標(biāo)本中Hp呈陽(yáng)性，并且這5例患者中4例患者伴發(fā)RAU。三種引物PCR

11、技術(shù)檢測(cè)RAU患者胃粘膜Hp均呈陽(yáng)性的43例患者中，相應(yīng)的唾液標(biāo)本Hp檢出率為72.09％(31/43)。RUT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)246例患者胃粘膜Hp，檢出率為32.93％(81/246)，與引物16SrRNA的PCR檢測(cè)胃粘膜Hp檢出率62.20％(153/246)比較，二者差異顯著(P＜0.01)，PCR技術(shù)的Hp檢出率顯著高于RUT實(shí)驗(yàn)。引物16SrRNA的PCR檢測(cè)有、無(wú)反酸癥狀的消化道疾病患者胃粘膜Hp檢出率分別為：77.06(84/

12、109)和50.36％(69/137)，二者比較差異顯著(P＜0.01)。引物16SrRNA的PCR檢測(cè)有、無(wú)反酸癥狀的消化道疾病患者唾液Hp檢出率分別為：66.06％(72/109)和43.07％(59/137)，二者比較差異顯著(P＜0.01)。有反酸癥狀伴發(fā)RAU的患者，消化道疾病患病時(shí)間與RAU發(fā)病時(shí)間均為1年以上，并且消化道疾病患病時(shí)間早于RAU發(fā)病時(shí)間。應(yīng)用SSCP技術(shù)分析三種引物PCR檢測(cè)43例RAU患者胃粘膜Hp均為陽(yáng)性

13、的基因型，其條帶型共有6種。三種引物PCR檢測(cè)RAU患者胃粘膜及唾液標(biāo)本Hp均呈陽(yáng)性的29例患者中，其24對(duì)胃粘膜和唾液標(biāo)本的SSCP條帶型基本一致，而有5例患者的胃粘膜和唾液標(biāo)本的SSCP條帶型呈現(xiàn)基因變異的差異。討論：有關(guān)口腔中Hp的來(lái)源，有很多種不同的看法，通過(guò)問(wèn)卷調(diào)查我們發(fā)現(xiàn)：246例患者中有44.31％的患者伴有不同程度的反酸癥狀，其中69.72％的患者同時(shí)伴發(fā)RAU，引物16SrRNA的PCR技術(shù)檢測(cè)有反酸癥狀的消化道疾病患

14、者胃粘膜及唾液中Hp檢出率顯著高于無(wú)反酸癥狀的患者：提示消化道疾病患者的反酸癥狀與RAU的發(fā)病及Hp檢出率存在關(guān)聯(lián)。但口腔內(nèi)Hp菌株是否為RAU的致病菌還不能定論；慢性胃炎和消化道潰瘍患者的RAU發(fā)病率無(wú)顯著差異，而消化道疾病患者RAU的發(fā)病率卻顯著高于健康人群，且消化道疾病伴發(fā)RAU患者口腔胃粘膜和唾液內(nèi)Hp菌株的檢出率均顯著高于非RAU患者，表明消化道疾病與RAU的發(fā)病之間存在關(guān)聯(lián)。本實(shí)驗(yàn)研究結(jié)果證實(shí)了胃內(nèi)Hp與口腔Hp的存在具有一

15、定的相關(guān)性，口腔內(nèi)也可能單獨(dú)存在Hp菌株，口腔是Hp的另一個(gè)寄居地?？谇粸镠p傳播的中轉(zhuǎn)站，Hp可能不僅僅是特異地定植與胃型上皮。因此，在Hp的防治中，清除口腔內(nèi)Hp也是一項(xiàng)重要措施。我們還發(fā)現(xiàn)：RAU和非RAU患者的口腔綜合情況也呈現(xiàn)出差異，多數(shù)RAU患者口腔衛(wèi)生習(xí)慣、口腔衛(wèi)生較差，但也存在一些口腔衛(wèi)生習(xí)慣、口腔衛(wèi)生較好的RAU患者。由于口腔是Hp生長(zhǎng)的理想生態(tài)環(huán)境，口腔牙周袋內(nèi)有較低的氧化還原電位，有利于Hp在口腔中寄生，所以我們推

16、測(cè)RAU患者口腔內(nèi)環(huán)境是Hp菌株的理想生存環(huán)境，Hp可能是RAU發(fā)病的致病菌之一。另外口腔衛(wèi)生較差，菌斑、牙石較多，刷牙或飲食的作用造成部分菌斑、牙石脫離牙面，通過(guò)吞咽可能會(huì)造成寄生于口腔中的Hp進(jìn)入消化道，導(dǎo)致與Hp有關(guān)的消化系統(tǒng)疾病的發(fā)生與復(fù)發(fā)。因此，保持口腔衛(wèi)生不僅是維護(hù)口腔健康的關(guān)鍵，亦可能會(huì)對(duì)消化系統(tǒng)疾病造成影響。加強(qiáng)口腔衛(wèi)生護(hù)理，減少牙菌斑、軟垢、深牙周袋等Hp賴以生活的環(huán)境，Hp才不能在口腔中孳生；通過(guò)抗Hp治療后的消化道

17、疾病患者減少了再感染的機(jī)會(huì)，同時(shí)也減少了Hp再次進(jìn)入口腔導(dǎo)致引發(fā)口腔疾病的機(jī)會(huì)。不同的Hp菌株基因表現(xiàn)型極為相似，而基因型之間又存在著變異，這就為從分子水平上鑒別不同的Hp菌株提供了依據(jù)。我們對(duì)PCR檢測(cè)RAU患者胃粘膜Hp菌株陽(yáng)性產(chǎn)物進(jìn)行SSCP分析，其帶型可歸為6種，證實(shí)Hp與其它細(xì)菌的特別不同之處在于其表型特征的一致性及基因組織結(jié)構(gòu)的高度變異性。而對(duì)RAU患者胃粘膜和唾液標(biāo)本均為Hp陽(yáng)性的29對(duì)菌株進(jìn)行基因多態(tài)性分析，發(fā)現(xiàn)82.7

18、6％的Hp菌株呈現(xiàn)相同的基因多態(tài)性，因此我們推測(cè)口腔和胃內(nèi)Hp菌株可能具有同源性，同一個(gè)體的口腔和胃內(nèi)存在同種Hp菌株的可能性較大，但口腔和胃內(nèi)也有可能存在不同的Hp感染，Hp可能是口腔潰瘍和消化道疾病共同的致病菌之一，口腔中的Hp可能參與了RAU的形成，也可能是造成RAU復(fù)發(fā)的原因之一，或在某一環(huán)節(jié)上起了作用，抑或是參與、加強(qiáng)了其它RAU致病因素的致病過(guò)程。實(shí)驗(yàn)中通過(guò)應(yīng)用PCR、RUT等多種Hp的檢測(cè)方法，證實(shí)PCR特異性、靈敏性更高