實(shí)時熒光定量PCR檢測急性淋巴細(xì)胞白血病患者TCR VγI-Jγ基因重排.pdf

1、目的導(dǎo)致急性淋巴細(xì)胞白血病(ALL)復(fù)發(fā)的主要原因是微小殘留病(MRD),故監(jiān)測MRD對ALL患者的病情和治療效果判斷、早期預(yù)測復(fù)發(fā)等預(yù)后分析、以及決定進(jìn)一步治療策略有重要的意義.研究已經(jīng)證明T細(xì)胞受體(TCR)基因的可變區(qū)(Ⅴ)和連接區(qū)(J)片段在干細(xì)胞向淋巴系分化時會發(fā)生特異性重排,形成每個淋巴細(xì)胞克隆特有的V-D-J片段,可作為基因標(biāo)志應(yīng)用于ALL等惡性血液病微小殘留病(MRD)的檢測.目前國內(nèi)常規(guī)檢測TCR基因重排主要是定性聚合

2、酶鏈反應(yīng)(PCR)技術(shù),雖然單純定性PCR檢測可以發(fā)現(xiàn)MRD,但臨床發(fā)現(xiàn)其實(shí)際意義有限,因?yàn)橥瑯佑蠱RD存在的病人可能出現(xiàn)復(fù)發(fā),也有部分病人的病情卻一直緩解,這反映了ALL患者的MRD存在數(shù)量上的差異.同時常規(guī)PCR方法還有假陽性、非特異擴(kuò)增、擴(kuò)增后電泳操作所致誤差及EB染色對人體有害等問題. 該研究課題就是為克服目前存在的上述問題,進(jìn)一步提高白血病患者M(jìn)RD檢測的臨床應(yīng)用價值,建立實(shí)時熒光定量PCR(FQ-PCR)檢測ALL病人T細(xì)胞

3、受體(TCR)VγI-Jγ基因重排的方法,為臨床ALL治療的研究提供更準(zhǔn)確的依據(jù).結(jié)論1、所構(gòu)建的TCRVγI-Jγ質(zhì)粒標(biāo)準(zhǔn)品特異性和線性關(guān)系好,準(zhǔn)確可靠,利于統(tǒng)一標(biāo)準(zhǔn).2、所建立實(shí)時熒光定量PCR方法快速、靈敏,特異性高,重復(fù)性好;且操作簡便、安全,更適合臨床檢測的需要.3、初步的臨床研究表明初治組、CR組及HSCT組三個不同組間模板水平存在顯著性差別,CR組及HSCT組的陽性病人的MRD水平也存在較大量的差異,顯示定性PCR檢測陽性