漢族人維生素D受體基因多態(tài)性與退變性腰椎間盤病的相關(guān)性研究.pdf

1、本文研究漢族人VDR基因單核苷酸多態(tài)性與LDDD的關(guān)系，以探索漢族人LDDD的相關(guān)遺傳基礎(chǔ)。 測(cè)定VDR基因多態(tài)性的方法常用聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法，按PCR-RFLP法測(cè)定部分標(biāo)本后發(fā)現(xiàn)其精確性較差。于是將半定量PCR方法應(yīng)用到PCR-RFLP測(cè)定法中，用于測(cè)定VDR基因型，結(jié)果顯示其精確性和可重復(fù)性得到明顯提高。 采用半定量PCR-RFLP法測(cè)定VDR受體基因多個(gè)位點(diǎn)的多態(tài)性。結(jié)合這些

2、標(biāo)本所對(duì)應(yīng)的LDDD臨床癥狀和MRI，分析VDR基因多態(tài)性與LDDD的關(guān)系。發(fā)現(xiàn)在VDR基因的FokI、BsmI、ApaI、TruI和TaqI5個(gè)限制性內(nèi)切酶位點(diǎn)多態(tài)性中，TapI酶切位點(diǎn)多態(tài)性與LDDD相關(guān)。 第一部分：半定量PCR-RFLP酶切法的建立及VDR基因多態(tài)性測(cè)定方法探討目的：探討將半定量聚合酶鏈反應(yīng)(PCR)方法，應(yīng)用于PCR-RFLP酶切法中對(duì)提高基因多態(tài)性測(cè)定精確性和可重復(fù)性的作用；用此方法檢測(cè)維生素D受體(

3、VDR)基因多態(tài)性。 研究方法：收集81例健康漢族人外周靜脈血標(biāo)本，從血標(biāo)本中提取基因組DNA，依照常規(guī)方法取不同酶量用限制性片段多態(tài)性(RFLP)酶切法先后測(cè)定81例漢族人維生素D受體(VDR)基因BsmI酶切位點(diǎn)多態(tài)性；對(duì)PCR產(chǎn)物進(jìn)行半定量和分類后，調(diào)整酶切體系中產(chǎn)物濃度，先后用不同酶量測(cè)定此組漢族人VDRBsmI、TruI多態(tài)性，考察其一致性。 研究結(jié)果：1.PCR-RFLP和半定量PCR-RFLP法測(cè)定81例漢

4、族人VDR基因BsmI酶切位點(diǎn)多態(tài)性，先后兩次測(cè)定的Kappa值為0.71和0.87，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P＜0.01。2.測(cè)得漢族人的VDRBsmI位點(diǎn)基因型頻率為BB6.2％，Bb49.4，bb44.4％；VDRTruI基因型頻率為T'T'69.1％，T't'25.9％，t't'4.9％。 研究結(jié)論： 1.應(yīng)用半定量PCR方法可明顯提高PCR-RFLP酶切法的精確性和可重復(fù)性。 2.漢族人VDR基因存在TruI

5、多態(tài)性，其多態(tài)性分布與白種人群不同。 第二部分：漢族人VDR基因多態(tài)性與退變性腰椎間盤病的關(guān)系目的：應(yīng)用半定量聚合酶鏈反應(yīng)-限制性片段長(zhǎng)度多態(tài)性(PCR-RFLP)法測(cè)定漢族人維生素D受體(VDR)基因多態(tài)性；結(jié)合退變性腰椎間盤病(LDDD)的臨床和MRI表現(xiàn)探討VDR基因多態(tài)性與LDDD的關(guān)系。 研究方法：收集漢族人群中81例有LDDD癥狀的患者和101例對(duì)照者的外周靜脈血標(biāo)本以及MRI。病例組中男41例，女40例，年

6、齡(42.7±13.7)歲，對(duì)照組中男40例，女61例，年齡為(38.4±12.6)歲。提取標(biāo)本的基因組DNA，用半定量PCR-RFLP法測(cè)定對(duì)照組和病例組標(biāo)本的VDRFokI、ApaI、TaqI、BsmI和TruI酶切位點(diǎn)多態(tài)性；根據(jù)MRI顯示的信號(hào)差異按Schneiderman分級(jí)法確定各個(gè)體腰椎間盤的退變程度，分為無(wú)LDDD、輕度LDDD、中度LDDD與重度LDDD四組。分析病例-對(duì)照組中基因型、等位基因頻率分布規(guī)律；分析基因型分

7、布、等位基因頻率與腰椎間盤退變MRI分級(jí)的關(guān)系； 研究結(jié)果： 1.對(duì)照組中FokI、BsmI、ApaI、TruI(用T'、t'表示)和TaqI位點(diǎn)的等位基因頻率的分布為F59.4％，f40.6％；B31.1％，b68.8％；A34.7％，a65.3％；T'79.2％，t'20.8％；T92.1％，t7.9％。病例組中VDRFokI、VDRBsmI、VDRApaI、VDRTruI和TaqI酶切位點(diǎn)的等位基因頻率的分布為：F

8、53.7％，f46.3％；B37.0％，b63.0％；A28.4％，a71.6％；T'80.9％，t'19.1％；T98.8％，t1.2％。病例組中VDRTaqI等位基因T攜帶者明顯多于對(duì)照組。差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。 2.在MRI分組中，VDRTaqI基因TT型在重度LDDD的分布比中度LDDD、輕度LDDD和無(wú)LDDD高，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，而VDRFokI、BsmI、ApaI、TruI位點(diǎn)的基因型分布差異無(wú)統(tǒng)計(jì)學(xué)意